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标题:【求助】感受态与质粒转化

rxcc33[使用道具]
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发表于 2015-1-29 11:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
制备完感受态要放入-80℃保存啊，转化时取出来置于冰上自己融，然后就加质粒开始转化了啊，怎么还要活化？

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制备好的感受态一定要放-80℃保存吗，即使不是批量做，第二天就要做质粒转化？-80℃的感受态取出来化冻就可以直接做质粒转化？转化率会下降吗？
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uaubc[使用道具]
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发表于 2015-1-29 11:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
所有的过程就是注重细节，完善步骤。。。或许在无菌状态下可以再做一下。
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49888[使用道具]
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发表于 2015-1-29 11:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

怎么能放4° ？？？要放-80°啊！
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ha111[使用道具]
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发表于 2015-1-29 11:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是做了感受态以后，接着就要做质粒转化，所以就没有放到-80℃保存，因为不是批量做感受态，而是放在4℃ ...

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那你放在-20都比4度强啊，感受态都是放在冰山融化，冰的温度多少，比4度低吧。这东西很矫情，尽量严格来做吧
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bluelake[使用道具]
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发表于 2015-1-29 11:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那个word 我下不来  请发给我吧   谢谢！

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什么word啊？
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toy[使用道具]
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发表于 2015-1-29 11:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

根本就不是放置温度的问题，做好后24小时之内就用的话是可以放4度的，应该是感受态没做好，取1ml过夜培养的菌加入到100mlLB里边后摇2-3h就够了，如果是直接挑单菌落摇菌大概5h也行了，最好用大瓶摇保证里面的氧气充足
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发表于 2015-1-29 11:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 toy 于 2015-1-29 11:16 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

根本就不是放置温度的问题，做好后24小时之内就用的话是可以放4度的，应该是感受态没做好，取1ml过夜培养的菌加入到100mlLB里边后摇2-3h就够了，如果是直接挑单菌落摇菌大概5h也行了，最好用大瓶摇保证里面的氧气充足
...

可能真的是感受态没做好吧，不过前前后后做过很多次了，都没成功
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发表于 2015-1-29 11:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 bluelake 于 2015-1-29 11:17 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

可能真的是感受态没做好吧，不过前前后后做过很多次了，都没成功

看一下你的DH5α菌株有没有问题，最好能用原始菌株，而且不能是反复冻融过的，实在不行就买吧，还有可能是载体或连接酶等其他东西失活，不过看你的情况，这种可能性比较小
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发表于 2015-1-29 11:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用的也是50微克每毫升LB

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里面有甘油保存的话活化不是很快的事吗？
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bluelake[使用道具]
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发表于 2015-1-29 11:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看一下你的DH5α菌株有没有问题，最好能用原始菌株，而且不能是反复冻融过的，实在不行就买吧，还有可能是 ...

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菌在液体LB中可以长出来，就是做完感受态后做质粒转化，在固体LB（加氨苄）上涂板长不出来，而且没有氨苄的板上也长不出来
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