关于色谱峰分叉问题

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标题:[未解决]关于色谱峰分叉问题

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hhm1017[使用道具]
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发表于 2010-12-28 13:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我最近遇到一个新问题：做有关物质的时候，供试品主峰不分叉，反而1%对照主峰分叉了（确定不是其他杂质），当增加1%对照进样量的时候两个分叉的峰还完全给分成两个分开的峰了，柱子为氨基柱（流动相为ACN：0.05M磷酸盐(pH为4.9左右）=61：39)，经过正相处理（甲醇、异丙醇、二氯甲烷冲洗、异丙醇、甲醇）后没有改变，以前也用过同品牌的柱子相同的色谱条件做相同的样品均没有出现这种情况，现在不知道是柱子本身的问题还是什么原因，请教各位高手有没有遇到类似的问题？

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miracle 2010-12-28 14:07 可用分 +2 鼓励坛友发起话题交流！欢迎常来！ ...

syc840313[使用道具]
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发表于 2010-12-28 14:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

是新的柱子吗，换个柱子试试看，

生活eesf[使用道具]
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发表于 2010-12-28 17:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

含量高能分叉吗？不太理解！意思是过载了吗？

JJSIE--NNE[使用道具]
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发表于 2010-12-28 17:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可能是对照主峰含量太高，而使分离效果变差，一般这类的化合物分离时容易出现这种情况。建议减少进样量试试，特别是进样体积。

njyyyil[使用道具]
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发表于 2010-12-29 00:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

样品不稳定或者污染了？

饮食男女[使用道具]
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发表于 2010-12-29 00:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

建议做样品的稳定性考察，看看是否是样品不稳定造成的，或简单调整进样顺序，同一个样品，放置不同时间，多次进样，考察峰形、出峰时间和峰面积差别。

thereyoube[使用道具]
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发表于 2010-12-29 00:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 hhm1017 于 2010-12-28 13:36 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我最近遇到一个新问题：做有关物质的时候，供试品主峰不分叉，反而1%对照主峰分叉了（确定不是其他杂质），当增加1%对照进样量的时候两个分叉的峰还完全给分成两个分开的峰了，柱子为氨基柱（流动相为ACN：0.05M磷酸盐(pH为4.9左右）=61：3 ...

一种可能是色谱柱问题：试品主峰浓度高分叉被掩盖了，在低浓度的对照溶液下，就看出两个峰了，只能充分清洗后再检测；一种是样品本身确实有两个峰，就要找原因是不是被污染了，还是样品变质了，原来的柱子都不能用了吗，如果还有，拿原来的柱子对比一下，检测过程中压力稳定吗？

ttkl533[使用道具]
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发表于 2010-12-29 00:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你的问题最大的可能是样品溶剂效应，就是配制标准品的溶剂与流动相不一致，导致进样后样液中有一部分液体前冲（比如pH值没有经过缓冲，柱子对它保留不住），所以进样体积越大分叉就越明显。改正的方法很简单，标品储备液稀释时使用流动相即可，被分析样品同样也要注意。

hhm1017[使用道具]
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发表于 2010-12-29 09:02 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #8 ttkl533 的帖子

我是做有关物质，供试品浓度下不分叉，1%对照分叉，样品时新鲜配制，溶剂确实不是流动相，用这种方法做这个品种都做了很长时间了，以前柱子做到坏都没有出现这种现象，现在突然出现这种情况，我怀疑是色谱柱的原因，正在购买新柱确定。

chenxiaohu[使用道具]
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发表于 2010-12-29 10:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你的样品有手性中心吗，如果有两个及两个以上的手性中心，在普通色谱柱上有可能会出现多个峰。

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