这试验我仔细作过:
通常讲乙腈的洗脱强度略高于甲醇,比如对A化合物来说10%乙腈的洗脱效果与15%甲醇的效果相当,但这只是大概,对不同化合物来说这个比值是有差异的。你可以做一个试验两个极端条件是上述两种流动相(分别是N和M),然后中间用N/M分别为1/4;2/3;3/2;4/1分别近样混合标准溶液,最后你会看到,在A化合物前后的其他成分会有规律的移动,从而得到一张横坐标为溶剂比例纵坐标为保留时间(或容量因子)的图,它很重要,从图中可以看到个组分保留时间相隔最远的情况就是最佳溶剂配比,相反,如果有某两组分的保留时间一致,说明在此比例下两者会出现峰重叠。我用这种方法找到分离复杂样品的最佳甲醇/乙腈配比,再用这个混合有机溶剂与水完成2元梯度洗脱。用这种方法还可以实现由两台泵进行3元梯度调整,即流动相中的甲醇、乙腈、水三种溶剂随时间同时变化。更详细的情况可以参阅我们的论文。