请教HPLC测ATP

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标题:[未解决]请教HPLC测ATP

[未解决]本主题悬赏可用分 10

rioily[使用道具]
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发表于 2011-1-5 08:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

最近打算用HPLC测定肝细胞内的ATP水平，色谱条件没什么问题，标准品跑的结果也不错。但是样品处理方法上有所疑惑，希望再次得到帮助。
我看了若干文献，样品的处理方法大体就是用0.5M的高氯酸破碎细胞，然后K2CO3调PH至中性，上柱检测。今天我去配了0.5M的高氯酸，用PH计测了下，发现PH只有0.5？？？这个要往7.0调？是这样吗？
还是细胞悬液（组织匀浆）中有其他成分，与0.5M的高氯酸混匀后，PH就不再是这么低了？
盼回复，先谢~

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miracle 2011-1-5 09:20 可用分 +2 鼓励新手发起话题交流！欢迎常来！ ...

trymybestchy[使用道具]
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发表于 2011-1-5 09:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

用PH计测，不对
用指示剂法
供参考

HEC_css[使用道具]
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发表于 2011-1-5 15:16 资料个人空间短消息加为好友

小中大

就是要调整至中性,这种情况高氯酸不仅仅是破碎细胞主要是起到沉淀蛋白的作用,用量一般比较少的,我做过心肌细胞的,高氯酸用量为0.1ml,然后还需要离心取上清液,调节PH我选择的是1M的KOH,感觉你选用K2CO3可能效果不是那么好需要加入量应该要多些

hewen0925[使用道具]
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发表于 2011-1-5 19:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 rioily 于 2011-1-5 08:39 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
最近打算用HPLC测定肝细胞内的ATP水平，色谱条件没什么问题，标准品跑的结果也不错。但是样品处理方法上有所疑惑，希望再次得到帮助。
我看了若干文献，样品的处理方法大体就是用0.5M的高氯酸破碎细胞，然后K2CO3调PH至中性，上 ...

如果是水溶液可以用ph计测量。用指示剂法快速，但是污染一部分样品

后者，配了0.5M的高氯酸然后处理细胞，处理完毕后，再用K2CO3调PH至中性

gitde[使用道具]
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