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标题:【求助】怎么区分污染和引物二聚体

米囡[使用道具]
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发表于 2015-2-13 09:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】怎么区分污染和引物二聚体


最近做了次定量，融解曲线显示NTC有峰，大小和目标基因差不多，请问怎么区分污染和引物二聚体，我同一批次的其他阴性都没有峰，是不是可能该对引物被污染了，或是引物不好，其他原因？


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xue258[使用道具]
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发表于 2015-2-13 09:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你指的污染是gDNA污染么，如果是这个污染，应该也扩出目的基因的。
你目的片段多大，引物二聚体的大小应该不会直逼目的片段长度吧。
溶解曲线有两个峰，首先考虑是否是引物特异性不好。
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发表于 2015-2-13 09:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

应该是引物不行
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flyxx05[使用道具]
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发表于 2015-2-13 09:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

换引物试试吧
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米囡[使用道具]
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发表于 2015-2-13 09:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 flyxx05 于 2015-2-13 09:45 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

换引物试试吧

之前有人用这对引物做过，效果还行，并无二聚体和非特异扩增，我也做了下普通PCR，只有二聚体，没有目的条带，哎，难道是我的条件摸的不对吗？
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发表于 2015-2-13 09:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我之前做也出现过这种情况  师兄建议我换引物  慢慢摸索吧  
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发表于 2015-2-13 09:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也正准备做这部分内容，看了很多相关资料，出现单峰曲线说明引物特异性较好，建议你再重新设计引物，摸下条件，然后再做！
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fklo83[使用道具]
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发表于 2015-2-13 09:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

或许是因为印务特异性不够，你试着提高退火温度
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发表于 2015-2-13 09:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

重复试验不一定会成功，还是引物多试下吧
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sunnyB[使用道具]
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发表于 2015-2-13 09:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
试下梯度，温度梯度包括模板和引物的浓度梯度，优化一下条件看看
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