PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】PCR跑电泳跑成这是怎么回事？

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 18  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】PCR跑电泳跑成这是怎么回事？

chenshuanhe[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107984
精华 0
积分 204
帖子 148
信誉分 100
可用分 1493
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
1

发表于 2015-2-14 23:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】PCR跑电泳跑成这是怎么回事？

第一轮pcr条带不是很亮，又做了以第一轮为模板做了一轮巢式PCR，结果跑电泳跑的拖尾 条带在最顶端。

第一轮循环数34，以cDNA为底物，加2ul

第二轮循环数30，以第一轮产物为底物，加2ul


查看积分策略说明
附件
2015-2-14 23:19
8.20PCr.jpg (25.23 KB)
 
2015-2-14 23:19
8.17PCR.jpg (23.33 KB)
 
顶部
chenshuanhe[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107984
精华 0
积分 204
帖子 148
信誉分 100
可用分 1493
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
2

发表于 2015-2-14 23:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
上面2个图放反了 第二张图是第一轮PCR结果 ，第一张图是第二轮PCR结果
顶部
HPLC使者[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76541
精华 0
积分 250
帖子 260
信誉分 100
可用分 2011
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-7
状态 离线
3

发表于 2015-2-14 23:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
感觉巢式PCR会不会加模板量太大了啊，把首轮PCR产物稀释一下再做巢式可能会好点。
顶部
nikun230[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107980
精华 1
积分 258
帖子 231
信誉分 102
可用分 1901
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
4

发表于 2015-2-14 23:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

条带很不清晰，你看看是不是你的引物特异性有问题，如果不好的话就重新设计引物吧
顶部
yapuyapu[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76072
精华 3
积分 574
帖子 695
信誉分 106
可用分 4338
专家分 30
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
5

发表于 2015-2-14 23:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有没有可能是胶的原因呢？
顶部
avi317[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74131
精华 0
积分 566
帖子 811
信誉分 100
可用分 4896
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-6
状态 离线
6

发表于 2015-2-14 23:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
第一轮的产物一般稀释50-100倍用于第二轮的模板
顶部
jingling845[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103462
精华 0
积分 330
帖子 380
信誉分 100
可用分 2671
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
7

发表于 2015-2-14 23:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

第一轮的引物特异性不好，可以重新设计下；第二轮加样多了，加个0.3ul-0.5ul应该就够了。
顶部
chenshuanhe[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107984
精华 0
积分 204
帖子 148
信誉分 100
可用分 1493
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
8

发表于 2015-2-14 23:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 jingling845 于 2015-2-14 23:22 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

第一轮的引物特异性不好，可以重新设计下；第二轮加样多了，加个0.3ul-0.5ul应该就够了。

我是扩3‘端  现在扩增出一个保守区，设计了特异引物，和3’带oligo DT的引物PCR的
顶部
chenshuanhe[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107984
精华 0
积分 204
帖子 148
信誉分 100
可用分 1493
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
9

发表于 2015-2-14 23:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 yapuyapu 于 2015-2-14 23:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

有没有可能是胶的原因呢？

不是吧，跑了2块胶都这样
顶部
yes4[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77377
精华 0
积分 764
帖子 1145
信誉分 101
可用分 6575
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
10

发表于 2015-2-14 23:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
第一张图是胶有问题
顶部
 18  1/2 12››