小中大【求助】恳求各位高手和经验人士给与帮助
大家好!这是我前几天做的跑的电泳图。2000的Marker,图中7、11号中大于2000的片段是我想要的,小片段是非特异扩增。pcr反应条件为95℃预变性5min; 94℃变性30s,50℃退火40s,72℃延伸3min,35个循环;72℃延伸5min
我做的是细菌,祝福法提DNA,用一对引物扩增可变区(目的片段大小不定,但至少大于2000)酶我用的宝生物普通Taq酶,合成引物退火温度分别57℃、59℃
本来我想优化下反应条件以得到特异量更多的产物,可是没想到就再也做不出来了。现在做PCR真能得到小于700的非特异条带了,我尝试过重新提模板、新配引物、降低退火温度等,可均失败了。欲哭无泪啊,求各位高手帮助!