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标题:【求助】菌液PCR跑的胶，隐约有几条带，请问为什么...

bamboo16[使用道具]
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发表于 2015-2-15 17:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】菌液PCR跑的胶，隐约有几条带，请问为什么...

这是前段时间跑的菌液pcr，在某几个泳道里隐约有几条带，但是不是很明显，非常的淡，请问，这是不是引物特异性不好的原因啊？


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2015-2-15 17:24
菌液PCR.JPG (25.65 KB)
 
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xue258[使用道具]
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发表于 2015-2-15 17:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
修改一下PCR反应条件

最好是退火温度，做个梯度PCR试试。
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莓菓333[使用道具]
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发表于 2015-2-15 17:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

其实很有可能是菌液的问题，菌液这些会使影响pcr
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wzqzy[使用道具]
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发表于 2015-2-15 17:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你做的是连接吧 我也遇见过类似的情况 很正常的 说明没有连上 只是连上了一小段 需要重新连接
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idea2011[使用道具]
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发表于 2015-2-15 17:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

再拿做出来的菌落，重新PCR一次~最好菌落划线在挑~~
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2015-2-15 17:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可能跟你的菌液模版有关，可以尝试先加好体系，然后直接挑入菌落作为模版~~
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bamboo16[使用道具]
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发表于 2015-2-15 17:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 idea2011 于 2015-2-15 17:25 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

再拿做出来的菌落，重新PCR一次~最好菌落划线在挑~~

请问菌落怎么划线啊？是把已筛选出来的菌落在另一个培养基上划线培养后再挑么？
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发表于 2015-2-15 17:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问菌落怎么划线啊？是把已筛选出来的菌落在另一个培养基上划线培养后再挑么？

======================================

对呀~~抗性筛选多一次，有利于排除假阳性菌落
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lagua123[使用道具]
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发表于 2015-2-15 17:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有没有做阴性对照？
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发表于 2015-2-15 17:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

做的是菌液鉴定吗，有可能是引物降解了，重新溶一管干粉试试
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