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标题:【求助】帮忙看一下哪里出了问题

菠萝喵[使用道具]
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发表于 2015-2-15 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】帮忙看一下哪里出了问题


这个最近怎么跑出来都有拖带，同样的体系和反应条件以前都能跑的很漂亮，而且也用了新的酶和引物还是有拖带，把循环数调低了也没效果。求助高手帮忙解答一下，该怎么改进呢！


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2015-2-15 17:44
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iii_ii[使用道具]
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发表于 2015-2-15 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
感觉是你引物特异性不够高的原因，你提高点退火温度试试，每2度一个梯度，做个梯度
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发表于 2015-2-15 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 iii_ii 于 2015-2-15 17:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
感觉是你引物特异性不够高的原因，你提高点退火温度试试，每2度一个梯度，做个梯度

退火梯度做过了，坐了12个温度梯度发现都有不同程度的拖带，不过后面虽然拖带不明显但目的条带的亮度又比较低
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jujuba[使用道具]
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发表于 2015-2-15 17:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

怎么做梯度？求教。
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发表于 2015-2-15 17:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们实验室也出现过这种问题，但是分析可能跟酶有关系！
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flyxx05[使用道具]
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发表于 2015-2-15 17:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

做个对照实验，看到底是酶，buffer，模版。。。哪出的问题。因为你说以前是很漂亮的，所以怀疑是实验体系中某一成分出现了问题。不过还是先确定一下你的模版有没有问题
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发表于 2015-2-15 17:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

同意六楼的意见，先确认一下模版的质量
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发表于 2015-2-15 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
感觉条带蛮锐的啊，但是拖尾这么严重。。。模板是不是有问题啊
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fangxiang[使用道具]
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发表于 2015-2-15 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个我感觉是你的模版有问题。
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菠萝喵[使用道具]
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发表于 2015-2-15 17:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 flyxx05 于 2015-2-15 17:45 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

做个对照实验，看到底是酶，buffer，模版。。。哪出的问题。因为你说以前是很漂亮的，所以怀疑是实验体系中某一成分出现了问题。不过还是先确定一下你的模版有没有问题
...

嗯，应该做个对照组看看哪里出了问题，最近用其他引物做了梯度效果就好很多，拖带不是那么强而且目标条带更亮一些。
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