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标题:【求助】各位大侠帮忙看看PCR结果哪出问题了。。。

bs4665[使用道具]
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发表于 2015-2-15 17:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】各位大侠帮忙看看PCR结果哪出问题了。。。

pcr扩增两种样本，其中一种存在约23bp的插入片段，所以理想的扩增结果如第一幅图（理论扩增图）结果所示，能够根据图区别出大小来，可实际结果中如下图（实际扩增结果）所示，目的带在一条线上。不知何故？恳请各位大侠指点下问题可能出在什么地方？
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jude[使用道具]
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发表于 2015-2-15 17:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

上下两组跑的时间一样吗？
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bs4665[使用道具]
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发表于 2015-2-15 17:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 jude 的帖子

一样的。。。，引物，体系，程序都一样的。。。。
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发表于 2015-2-15 17:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
23bp非常小，一般的电泳不容易分辨出来。你确定第二幅图的结果在实验方法、胶浓度、电泳条件（电压、时间）与第一幅是一致的么？
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发表于 2015-2-15 17:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

想问一下你的第二个图跑的是变性的胶还是不变性的PAGE胶？因为是23bp的差异，所以建议你使用一下6%的SDS-PAGE胶试一下，采用测序胶，估计时间是1.5h左右，采用恒压跑，电压为2000v，注意安全！！！
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bs4665[使用道具]
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发表于 2015-2-15 17:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
想问一下你的第二个图跑的是变性的胶还是不变性的PAGE胶？因为是23bp的差异，所以建议你使用一下6%的SDS-PA ...

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还有你确定是2000V，不是200V？   实验室没用过这么高电压跑过胶。。。。。。、。
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bs4665[使用道具]
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发表于 2015-2-15 17:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
23bp非常小，一般的电泳不容易分辨出来。你确定第二幅图的结果在实验方法、胶浓度、电泳条件（电压、时间） ...

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你好，条件是一致的。。。。。
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