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标题:【求助】为什么我重复师姐的PCR实验，就是出不了条带

mogu[使用道具]
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发表于 2015-2-15 20:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】为什么我重复师姐的PCR实验，就是出不了条带

我重复别人的已经做过的实验，引物、条件什么的都一样。只是cDNA模板是我自己提的，但是就是出不了条带。为了检测是哪里出错了，我也设计了很多实验，模板用别人的引物和条件做别人的东西也可以出条带。已经在这一步停留很久了，有大侠给点建议吗？
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baidukk[使用道具]
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发表于 2015-2-15 20:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一步一步检测确保cDNA、引物和PCR的试剂没问题，再看看引物与模板的匹配度
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2015-2-15 20:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的mRNA没有提好，可能降解了
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summerxx[使用道具]
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发表于 2015-2-15 20:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的模板有问题。
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standbyme[使用道具]
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发表于 2015-2-15 20:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有没有二聚体，什么都没有的话很可能就是引物问题！
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mogu[使用道具]
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发表于 2015-2-15 20:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 baidukk 于 2015-2-15 20:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

一步一步检测确保cDNA、引物和PCR的试剂没问题，再看看引物与模板的匹配度

cDNA模板给别人用了，能够出他们需要的条带。引物我现在还是定了跟师姐一样的，毕竟她做出来过。是不是存在我提出的模板并不适合他的引物的情况？
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mogu[使用道具]
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发表于 2015-2-15 21:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 standbyme 于 2015-2-15 20:56 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
有没有二聚体，什么都没有的话很可能就是引物问题！

所提的模板别人都可以用而且效果很好。二聚体不明显，提温的话二聚体明显
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mogu[使用道具]
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发表于 2015-2-15 21:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 summerxx 于 2015-2-15 20:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
你的模板有问题。

给别人用效果很好
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seagate[使用道具]
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发表于 2015-2-15 21:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
事RT的cDNA第一链做模板的吧？你的模板全长有多长？P的片段有多大？别人P的片段有多大？还有就是你的目的片段对应的RNA丰度有多大？我这段时间做RT也出现了类似的问题，之前P出来了，可是后来用相同的条件就P不出来了..........
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2015-2-15 21:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 seagate 于 2015-2-15 21:00 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
事RT的cDNA第一链做模板的吧？你的模板全长有多长？P的片段有多大？别人P的片段有多大？还有就是你的目的片段对应的RNA丰度有多大？我这段时间做RT也出现了类似的问题，之前P出来了，可是后来用相同的条件就P不出来了..........
...

我如今也是这般情况，相同条件下，之前p出来的东西再也不见了，郁闷死了
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