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标题:【求助】P出过一次的基因再也P不出来了

sr9971[使用道具]
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发表于 2015-2-16 10:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】P出过一次的基因再也P不出来了

两周前第一次P出的图，图有点难看，大家将就看下


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2015-2-16 10:57
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发表于 2015-2-16 10:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以看出，对照无任何条带，第一对引物有很多非特异性条带，第二对引物有疑似目的条带的特异性条带，因为条带比较淡，之前都没P过这么淡的条带，所以打算重新调整下条件等，但是后面重提过多次基因组，用过温度梯度，模板和引物浓度都调整过却再也没P出来过
提出来的基因组如下图


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发表于 2015-2-16 10:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
P出来的情况如图

用引物1,2仍能P出非特异性的一些条带，证明模板应该是没有问题的，如果是引物有问题，为什么之前又能P出和我要的目的条带差不多大小的条带勒？如果是P的条件的问题，我重复了很多次了，包括用和第一次一样的条件，酶也换过了，真的没办法了，求助各位友爱的朋友，到底是哪里有问题勒？


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发表于 2015-2-16 10:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

对了，引物也跑过电泳，一对引物亮度差不多，也没有降解，是新合成的，-20℃保存
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ritou1985[使用道具]
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发表于 2015-2-16 10:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

让师兄师姐帮你看一下引物有没问题吧
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发表于 2015-2-16 10:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

DNA浓度问题？我以前就是因为DNA浓度太高了，怎么P都P不出来。
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发表于 2015-2-16 11:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
唔，我就是最高年级的了，师兄们毕业了，引物应该没问题，我之前做出过一个基因了
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ffaa[使用道具]
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发表于 2015-2-16 11:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

娘啊，你这图的条带也太弱了吧。试剂没问题的话是不是你的模板量太少了？
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sr9971[使用道具]
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发表于 2015-2-16 11:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
模板加多了也一样的，而且去年P的更亮，今年P好弱啊，╮(╯▽╰)╭，怎么回事哦，不过我引物量没有加多，不知道是不是引物量得问题，我只加了1UL
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ffaa[使用道具]
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发表于 2015-2-16 11:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
引物还有干粉或者母液的话重新稀释一份试试看。
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