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标题:【求助】 293t细胞活力不好

mickeylin[使用道具]
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发表于 2015-2-23 18:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】 293t细胞活力不好

新手，刚养细胞，我看细胞形态还可以，就是长的很慢，培养基DMEN+10%FBS+0.1%双抗，基本上四天才能传，而且好多都是成簇的生长？求高手指点!


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mickeylin[使用道具]
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 小中大
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发表于 2015-2-23 18:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
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 小中大

传错了。。这个是10x的


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发表于 2015-2-23 18:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
重新复苏一管呗！
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 小中大

感觉细胞有些老化了，估计你们的培养条件不好，比如培养箱的温度波动大或者CO2含量变化大且时间长，导致细胞不能很好生长，或者你冻存细胞的时候，养的细胞太过头了，都有可能导致这种状态，FBS不好也会导致这样的状态
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发表于 2015-2-23 18:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

传细胞时传的太稀了！这个没问题，重新消化，传成两皿。
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发表于 2015-2-23 18:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
首先确认这是293T还是HEK293，一般HEK293形态和你的比较相近
1.可以把细胞密度调高点，如果你这是复苏以后的细胞密度，那就有点稀了。
2.传完细胞看一下，是不是成团，我觉得你没有消化好。正常消化完显微镜下看应该是单个的细胞。3.复苏细胞一般要恢复几代才能正常生长。
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 小中大
胰酶不能消化太久，1-2min；另外在处理细胞前DMEM要在37°C水浴中置一段时间，传代细胞密度在30%-40%。LZ可以再复一支试试，有时候要连复几支才能找到状态好的细胞。293T应该很好养，长的很快，基本1-2d传一次。祝好运
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mod=8048[使用道具]
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发表于 2015-2-23 18:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
貌似没有消化好吧！293T很好养，增殖也快的！
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