【求助】 293t细胞活力不好 - 经验共享

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标题:【求助】 293t细胞活力不好

mickeylin[使用道具]
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发表于 2015-2-23 18:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 am10 于 2015-2-23 18:41 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

感觉细胞有些老化了，估计你们的培养条件不好，比如培养箱的温度波动大或者CO2含量变化大且时间长，导致细胞不能很好生长，或者你冻存细胞的时候，养的细胞太过头了，都有可能导致这种状态，FBS不好也会导致这样的状态 ...

你好，细胞老化是主要看细胞空泡多少么。。。我在高倍镜下看细胞膜上都有一点点两的像孔一样的东西是空泡么？谢谢

mickeylin[使用道具]
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发表于 2015-2-23 18:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

首先确认这是293T还是HEK293，一般HEK293形态和你的比较相近
1.可以把细胞密度调高点，如果你这是复苏以后 ...

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你好，这是293T前十代的细胞，是复苏传了两代以后的

mickeylin[使用道具]
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发表于 2015-2-23 18:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

传细胞时传的太稀了！这个没问题，重新消化，传成两皿。

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我重新消化，传代密度调高，现在好一些，但是感觉还是有点成簇生长，看看转染之后怎么样。。。谢谢

mickeylin[使用道具]
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发表于 2015-2-23 18:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

首先确认这是293T还是HEK293，一般HEK293形态和你的比较相近
1.可以把细胞密度调高点，如果你这是复苏以后 ...

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请问一下，消化好是怎么个意思，需要完全把它从壁上消化下来，但是我怕消化时间长了对细胞有损伤，我现在都是直接胰酶加入覆盖细胞后吸走，用培养基把它从壁上吹打下来的，很容易就下来了。。。这样可以么？谢谢!

mybioon[使用道具]
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发表于 2015-2-23 18:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

重新复苏一管，多加点血清培养，等细胞长好了再传代，用含EDTA的胰酶消化，离心收集细胞后用枪充分重悬，使细胞分开成单个。传代后，保留20%左右细胞在培养瓶内

baidukk[使用道具]
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