液相色谱

本人最近在做葡萄酒中的着色剂，（胭脂红和苋菜红），相同的流动相（甲醇和0.02乙酸铵），相同的梯度方法，sunfire C18色谱柱，250*4.5*5，检测波长254纳米
早上做了20PPM的标准品，分得很好，峰型也不错。但是第二次进同一瓶标准品的时候，只出一个峰，出峰时间也提前了。

换方法，第一次也是出得很好，多平衡了会，第二次进的时候，峰都提前，而且两个峰重叠。

检查了流动相，试剂，仪器条件都没什么问题，真不知道怎么办了，2009年9月份第一次做5种着色剂（柠檬黄，日落黄，苋菜红，胭脂红，亮蓝），分得很好，峰型也漂亮。之后没怎么做着色剂，今年第一次做的时候，相同条件不出峰了。

迷惑中，请有经验的同志给点建议吧。

大侠，第一针好第二针就不好，那有没有做第三针、第四针呢？如果第三针与第二针相同，只能说明第一针是个偶然结果。其实每当新用一个色谱条件（或是每天的第一个样品）时，都应该先进一个空白，第二针再进样品，而且样品一定要至少连续进两次，这样你这个色谱条件是好是坏才能有个相对确切的比较。

既然这个条件分不开，就要针对分不开的原因对色谱条件做一些调整。
是因为拖尾、柱效不高？还是因为没有保留或保留时间太短？前者可以加一些离子对试剂，后者可以增加初始时刻的水相比例。

第一次进样与第二次进样之间有过停泵操作吗？是不是样品污染比较大，使用柱效降低了。

泵没停过，就是条件设好后，进一针试了下，然后接着走平衡，再进样，就不出峰了。。。。。

我进的是配好的标准品。

是不是你那标准品有问题，是新配的么？

新配的，标准品有问题的话第一针就不会出峰啊。

色素标准很稳定，不可能

条件不能重现，跟仪器的稳定性有关
至于2针不出峰，估计还是梯度条件没设计好

很多质检都有类似的情况出现，多为长时间的闲置设备有关，无法在短时间内回复到第一次做样品的分析状态。。需要花时间来平衡和维护系统。

我们也有出现过这种现象,多平衡几下就好了

多平衡，
不行换柱

如果进样环坏了，抽空。也是没有峰的。你换一条柱，再进另外的标样，看下是否是仪器问题。