手性分析

今日进行一手性化合物的液相色谱分离，结构如下图所示：

此样品用极性较大，用正己烷无法溶解，且在甲醇中的溶解度仅为3mg/ml，
由于使用正相手性柱，故用异丙醇进行溶解并超声，配成500ppm的母液，然后用正己烷逐级稀释；
在检测40ppm时，选用的hexane/IPA=90:10时，第二个峰有分叉现象，而hexane/IPA=85:15、80:20
则为正常，分叉现象是否可解释为40ppm溶液中的异丙醇含量过高，实际情况是40ppm样品中的IPA%仅为8%？

更为奇怪的，稀释到0.05ppm、0.1ppm、0.5ppm时，选用流动相比例为hexane/IPA=80:20、85:15，
前两个浓度仅出现一系列噪音，后者出现两峰雏形，并且报告中无峰面积显示，是否是由于
流动相极性较大（低浓度样品由于用正己烷稀释，异丙醇含量减少，样品极性很小），流动相
洗脱能力增强，溶质与固定相的作用减小，在固定相中的保留减弱，无法进行拆分？

对于此样品究竟如何稀释为好？谢谢！

[ 本帖最后由 miracle 于 2011-2-16 10:12 编辑 ]

稀释到0.05ppm、0.1ppm、0.5ppm时无峰出现，是因为样品浓度低于检测限，所以检测不出

对于第一问题：峰分叉，可试着这么解释：

由于该化合物在流动相中溶解度很小，而样品是用IPA溶解后再用正己烷逐步稀释的。
“。。。选用的hexane/IPA=90:10时，第二个峰有分叉现象，而hexane/IPA=85:15、80:20
则为正常。。。”从这些实验可推测是由于样品在hexane/IPA=90:10做流动相溶解性不好而导致峰分叉。

对于第二个问题，赞同2楼aasle朋友的解释，说明UV检测灵敏度不够高，而Hexane/IPA体系噪音较大。

解决办法：若有MS检测器的话，可考虑用LC-APCI-MS来检测。
另一方面，可优化HPLC分离条件，尝试极性有机相分离模式，比如使用95%CH3CN-5%IPA作为流动相，看是否有分离效果。乙腈紫外透光率低，或许能减少噪音。但需要留意，在Hexane/IPA转换到CH3CN时，需要用100%IPA过渡。

多试试吧。

低浓度没检测到

从高浓度往低浓度逐级稀释!!挨个进样试.

0.05ppm、0.1ppm、0.5ppm这个浓度是否已经低于检测限，无法正常检出。并且报告中无峰面积显示，改变积分参数再看看，降低最小峰面积，改变斜率，峰宽等。

如果样品不是 只有两种物质的标准溶液，那么，第二个峰出现分叉，可以理解为有样品中有其他杂质。如果是标准溶液，就难说了。

流动相种IPA含量增加，分叉峰消失，是因为洗脱能力增大引起的。

为什么不直接用流动相稀释呢？

有些不明白，是已经用正己烷：异丙醇85:15，分开了，还是没分开。
如果正己烷：异丙醇=90:10 第二个峰出现分叉，第一个峰按理说也应该有分叉，这是由于样品在流动相中溶解度变差，溶解速度变慢出现了二次进行的情况。
浓度低的时候检测不到峰可能是检出限比较差吧，出现雏形峰可以自己手划一下，或者把积分的阈值变低

应该用流动相稀释样品