小中大转载经验：筛选细胞系的经验
老板一个月前让筛个细胞系，质粒别人做的(用的是pIRES2载体)分别挂了2个基因，筛出2类细胞系。之前没做过，园子里一通乱翻，多少心里有了点底。于是动手：
1，杀伤曲线，(G418做不同浓度梯度培养要转的细胞)个人觉得，这个还是要做的，特别是新手，否则后边做起来心虚。要注意的是G418的浓度是指有效成分。我选择的筛选浓度是6～8天死亡最多的浓度。
2，转染，我做的是成纤维细胞，开始用脂质体，发现效果不大好，即使加大量，延长转染时间，效果还是一般。特别是，2个质粒中的一个，怎么都看不到绿色～载体测序又完全没问题。相当的莫名啊～于是想到换电击转染试试：电压从小到大，文献上能查到的都试了，不绿的那个质粒依旧不绿～
3，筛选：用5×10^6(来源于60mm培养皿)细胞做的电击，放到2个100mm培养皿中(1：10，也可以更大)，转染24小时后加G418筛。7 天左右，细胞大量死亡。换半量筛选浓度的G418继续筛。这里遇到的问题是，如果，筛选初期细胞密度过大，细胞大量死亡时间要推后的。
4，挑单克隆，筛选开始后大约15天左右，培养皿里已经能看到“一坨坨”的细胞了(包括当初看不到绿色的那个质粒转染的细胞)，此时，荧光镜下依然只能看到很少的绿色细胞。于是，准备按照园子里众位版友的经验，准备用TE浸润消化，10ul枪头挑绿色细胞。惊喜就在这个时候出现了，消化变圆的细胞在荧光激发下都变绿了～高兴的一塌糊涂～
总结，俩字：耐心～
表达能力比较差，大家对付看吧，要是刚好能对你有点帮助，那就……
ps所有的这些都是暑假做的，老板对别人说，“我给我的学生放3个星期假”。
但是对我们说：“觉得自己能毕业就放假回家。”
