PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】怎样设计miRNA RT-PCR 引物

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】怎样设计miRNA RT-PCR 引物

鲇鱼少爷[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103465
精华 0
积分 161
帖子 81
信誉分 100
可用分 1111
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
1

发表于 2015-3-10 11:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】怎样设计miRNA RT-PCR 引物


怎样利用NCBI,Oligo 6等设计 miRNA Forward primer和miRNA Reverse primer引物呢？谢谢！
顶部
wanglaoshi[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77295
精华 0
积分 449
帖子 597
信誉分 100
可用分 3796
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
2

发表于 2015-3-10 11:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

ab公司的策略是 发卡RT引物反转录  随后taqman探针做real-time。具体我也不清楚 望高人指教
顶部
eor[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 117906
精华 0
积分 392
帖子 484
信誉分 100
可用分 3226
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-12-7
状态 离线
3

发表于 2015-3-10 11:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
Qiagen方法是首先给miRNA加poly（A）+adapter，然后利用adapter的序列作为反向引物，miRNA本身为正向引物（或者5‘端修饰下）。然后和普通real-time PCR一样进行就可以了。这个可以自己设计，adapter就是一段随即引物，末端转移酶等。具体可以搜下相关资料。
顶部
xuuuu[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 118128
精华 1
积分 444
帖子 503
信誉分 102
可用分 3386
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-12-10
状态 离线
4

发表于 2015-3-10 11:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想知道到哪里能找到miRNA的引物序列，请高手指点
顶部
sr9971[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103461
精华 0
积分 212
帖子 163
信誉分 100
可用分 1556
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
5

发表于 2015-3-10 11:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

很多公司用的是在提取的总RNA加上poly A尾巴，再用poly T的引物做反转，然后用SYBR Green做荧光定量。ABI的TaqMan探针法，设计的是颈环引物，针对特定的microRNA，反转后以特定的引物和探针做荧光定量。反转录引物和荧光定量引物及探针组成一个assay。大多数研究的位点，都能在ABI网站上找到现成的assay。
顶部
yes4[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77377
精华 0
积分 764
帖子 1145
信誉分 101
可用分 6575
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
6

发表于 2015-3-10 11:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不知道颈环引物的那个固定序列怎么来的？还有颈环引物是做反转录吗？
顶部
yes4[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77377
精华 0
积分 764
帖子 1145
信誉分 101
可用分 6575
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
7

发表于 2015-3-10 11:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还有颈环引物做的RT的话PCR用探针法和染料法都可以还是只能用探针法做，请高手赐教！
顶部
yonger[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74174
精华 0
积分 572
帖子 803
信誉分 100
可用分 4861
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-7
状态 离线
8

发表于 2015-3-10 11:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有没有推荐的kit 急需啊！
顶部