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标题:【求助】无DNA样品的pcr,也能出现带,求解释

huifeng0516[使用道具]
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【求助】无DNA样品的pcr,也能出现带,求解释

本人选取老鼠的尾巴提取DNA然后跑pcr,最后电泳,鉴定基因敲出老鼠的基因型,样品管都是加提取的DNA,对照组我是加水,如下图从左往右,一二泳道为加水的对照管,后面三个是加了DNA的样品管,但水样中竟然都跑出了条带,我的PCR程序是1(1循环): 95°  ,3 min (1)
2(40循环):      95° ,30s
                      60°,30s
                      72°,1min
3(1循环):72°,5min
   我害怕是有气溶胶,因为这个做了好几年了,所以换了个楼层做的实验,试剂也换了,pcr仪器也是换了的,但还是同样的结果,只有引物是我刚刚设计出来的,先前我用这个引物把第二阶段的扩征改为了35个循环,但结果水样中仍然有诡异的带,请问有谁知道原因吗?
[img]file:///C:/Users/Administrator/AppData/Roaming/Tencent/Users/597136431/QQ/WinTemp/RichOle/%257Q[PEO_W6%7D%60SA9_~1M6%60%7B8


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bamboo16[使用道具]
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引物二聚体,设计引物的问题,或者就是试剂污染了
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is2011[使用道具]
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有没有注意,对照组的带和你第三个样品的目的带一般大。应该是试剂被污染了吧~~或者操作时带入了~~程序关系不大~
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huifeng0516[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 bamboo16 于 2015-3-10 16:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

引物二聚体,设计引物的问题,或者就是试剂污染了

我也怀疑是试剂污染,所以我把试剂都是重新换的,也是这结果,今天我换了楼层换了水做,还是这样,所以我就不知道什么原因了
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vcve[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 huifeng0516 于 2015-3-10 16:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我也怀疑是试剂污染,所以我把试剂都是重新换的,也是这结果,今天我换了楼层换了水做,还是这样,所以我就不知道什么原因了

如果引物确定没问题,那是操作的问题?
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fangxiang[使用道具]
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你镁离子浓度有多高,把镁离子浓度往下调,做梯度,如果还不行,就只能换引物了。
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tewank[使用道具]
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要么试剂污染了,要么水污染了。
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555444[使用道具]
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应该是你加样的时候污染了吗  少加一点看看 格几个孔
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33号[使用道具]
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操作上的问题首先考虑,戴手套特别是夏天!还有就是引物特异性不好!
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milkdog[使用道具]
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用水做对照 好像不对吧 应该加TE做对照吧
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