PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】定量PCR扩增效率如此之低怎么办啊？

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 11  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】定量PCR扩增效率如此之低怎么办啊？

coolcool[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 72942
精华 0
积分 264
帖子 227
信誉分 100
可用分 1941
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
1

发表于 2015-3-10 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】定量PCR扩增效率如此之低怎么办啊？


我做定量pcr扩出来的标准曲线R值很高，基本是条直线，可是就是扩增效率低的要命大约0.6-0.7.从来不大于0.8.更别说到1了，这可怎么办啊，我把标准品，引物，水全换了，引物浓度基本足够了，还是不能解决问题，怎么办啊怎么办。求大家救救急啊！！
顶部
yes4[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77377
精华 0
积分 764
帖子 1145
信誉分 101
可用分 6575
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
2

发表于 2015-3-10 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

保证设计的引物没问题
优化反应体系
顶部
coolcool[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 72942
精华 0
积分 264
帖子 227
信誉分 100
可用分 1941
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
3

发表于 2015-3-10 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
从哪些方面优化啊，我都试验了好多次了，找不到头绪
顶部
feiya[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 117889
精华 0
积分 247
帖子 234
信誉分 100
可用分 1911
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-12-7
状态 离线
4

发表于 2015-3-10 17:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这不是普通PCR，基本够了，这样的话只能是扩出条带，不能保证在最佳效率，
整体设计没有问题的情况下，引物浓度，镁离子浓度，酶的用量，DNTP用量，等方面，保证发挥最佳效率，
此外还要看看模板里有没有抑制剂的成分
顶部
coolcool[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 72942
精华 0
积分 264
帖子 227
信誉分 100
可用分 1941
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
5

发表于 2015-3-10 17:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
镁离子浓度，酶的用量，DNTP用量是试剂盒里配好了的，引物也通过加样量的变化试了调了下总体浓度，效果不明显。我的模板是用试剂盒提取的质粒，没有加什么有机溶剂一类的，实在是不知道所以然了
顶部
wood533[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76132
精华 0
积分 863
帖子 1385
信誉分 100
可用分 7745
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
6

发表于 2015-3-10 17:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
实验时切记避免SYBR反复冻融，我的实验曾今受过这个影响~~~~
顶部
memory[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76531
精华 0
积分 378
帖子 436
信誉分 100
可用分 2962
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-7
状态 离线
7

发表于 2015-3-10 17:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

引物有问题
顶部
coolcool[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 72942
精华 0
积分 264
帖子 227
信誉分 100
可用分 1941
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
8

发表于 2015-3-10 17:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢啦，的确是我的引物有问题，换了个其他的引物扩增效率高了好多，引物的设计及储存时间都会有影响呢
顶部
qhyu[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77304
精华 0
积分 705
帖子 1049
信誉分 100
可用分 6111
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
9

发表于 2015-3-10 17:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也出现这个问题！你是怎么解决的啊？求教下！
顶部
kewanqi2011[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76114
精华 2
积分 534
帖子 660
信誉分 104
可用分 4146
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
10

发表于 2015-3-10 17:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼主是重新设计的引物还是用新稀释的啊？我也遇到了这个问题，也有人说提高温度就好
顶部
 11  1/2 12››