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标题:【求助】用水都能PCR出条带来

莓菓333[使用道具]
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发表于 2015-3-10 17:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 婴儿脸 于 2015-3-10 17:22 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

首先，好像和loading buff 没关系 因为P初代不一样大，请问第二道也加水还是没加水，若加水了，为啥没P出3456的情况，这很可疑，如果加水了，没P出3456，不太可能是水污染；另外 3456P出来东西很浅，说明模板应该很少，应该是操作时有什么 ...

第二泳道是有LC3质粒的阳性对照。
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菠萝喵[使用道具]
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发表于 2015-3-10 17:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

超纯水。。。
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发表于 2015-3-10 17:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还是找到污染源吧，一个一个的排除。问问周围实验室有没有阴性对照做的好的实验室，排除气溶胶、移液器和水的问题。最后考虑引物的的本身污染，可以找公司重新合成。引物的问题我实验室碰到过。
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发表于 2015-3-10 17:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
照的好清楚哦~~也许是引物稀释的过程中出了问题，也许是枪头不干净吧
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seagate[使用道具]
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发表于 2015-3-10 17:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

估计你们实验室有目的基因气溶胶了，可以试着换个实验室做一下试试，另外双蒸水最好小管分装后灭菌，注意避免药品之间的交叉污染
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发表于 2015-3-10 17:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们最近做了一个实验，灭菌后的超纯水都能P出来，很有可能是实验室水源的原因，你们的水定期做过检测吗？  如果只做酸碱或细菌检测也是检测不到的必须要做一个支原体的检测。
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发表于 2015-3-10 17:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我PCR都是在超净台里做的 一直都还好
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发表于 2015-3-10 17:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

二聚体也会成倍数的递增的。
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发表于 2015-3-10 17:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

换引物吧，如果gapdh或者actin引物也出这个条带证明有问题，如果不是的话是不是引物的问题，引物而具体？
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IAM007[使用道具]
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发表于 2015-3-10 17:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
建议楼主彻底换所有的试剂，你一个试剂一个试剂的试其实很浪费时间和精力，并且还不一定能找出哪个试剂污染了。
另外，空气和水污染也有很大的可能，你换了所有试剂后，建议操作的时候去别的实验室做一次看看，最好不同楼层的。我记得以前我读研究生的时候，为了防止气溶胶污染，老板甚至建议我去楼顶上操作一次！
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