高效液相色谱仪的使用？？

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标题:[未解决]高效液相色谱仪的使用？？

[未解决]本主题悬赏可用分 10

luolei68[使用道具]
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发表于 2011-3-2 18:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

初入学习高效液相色谱反相（柱前衍生）测发酵液的氨基酸，用安捷伦1100，C18的柱子，紫外检测，应该怎么设置条件：比如流动相、洗脱梯度、PH、柱温等条件的确定？？？
或者刚开始怎么使用好？？？
希望了解的详解？在此多谢了！！

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miracle 2011-3-2 20:50 可用分 +2 鼓励新手发起话题交流！欢迎常来！ ...

wll0635[使用道具]
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发表于 2011-3-2 22:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

液相的分析测试条件相对来说较为简单。首先是色谱柱，一般多采用C18，当然也有C8等，选用什么样的柱子完全看你的目标分析物；其次是流动相，对于反相高效液相色潽来说，大多采用乙腈或甲醇与水的组合，比例也是根据目标物与色谱柱间的作用力大小决定，若其作用力大，则可以增大乙腈或甲醇的比例，当然为了可以完善峰形，需要调节流动相的pH值；检测条件的选择要依据目标物而定，看其最大吸收波长，一般会选择其最大吸收点处；柱温对液相的影响不是很突出，一般可以忽略，除非做精确实验的时候才会考虑。补充：如果流动相中使用了缓冲盐溶液，在实验完成后应先用水冲洗整个管路，然后再用90%的甲醇水溶液冲洗，以免造成管路堵塞。暂时先回复这么多，欢迎各位纠正补充

piaoliang110mei[使用道具]
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发表于 2011-3-2 22:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

您现在有什么方法呢?
是PICO-TAG,AQC,还是DNFB

氨基酸的实验对梯度洗脱要求高些,要准确,重复性要好

unknow[使用道具]
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发表于 2011-3-3 07:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #1 luolei68 的帖子

先参阅相关文献，可以搜出很多，如：
1、cuturl('http://img.docin.com/players/DocinViewer.swf?productId=7374152&channel=144&from=http%3A%2F%2Fblog.sina.com.cn%2Fs%2Fblog_50c1c4ce0100mwml.html&loadurl=file1.yimk.com')
2、cuturl('http://www.6lib.com/view_48FBA4CF4831361693.html')
3、cuturl('http://www.dikma.com.cn/Library/index/id/325')
尽管文献中用的柱子商品名奇奇怪怪，但本质都是反相柱，其条件可以借鉴。
通用梯度：
乙腈/水
0min：10%乙腈
10min：100%乙腈
18min：stop
进下一针要留出约5、6分钟梯度回归的时间。
然后根据实际分离情况对梯度的起始、斜率等做出调整。

配好的样品溶液在进样前一定要过滤，水相要每天换新的，每天做完样用纯乙腈冲10分钟柱子。养成好习惯，仪器才不溶于出毛病。

haohaorenjia[使用道具]
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发表于 2011-3-3 10:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 luolei68 于 2011-3-2 18:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
初入学习高效液相色谱反相（柱前衍生）测发酵液的氨基酸，用安捷伦1100，C18的柱子，紫外检测，应该怎么设置条件：比如流动相、洗脱梯度、PH、柱温等条件的确定？？？
或者刚开始怎么使用好？？？
希望了解的详解？在此多谢了！！ ...

这类氨基酸检测的相关文献很多了，楼主直接搜索一下就行。
cuturl('http://www.google.com.hk/search?hl=zh-CN&source=hp&biw=1024&bih=615&q=%E5%8F%91%E9%85%B5%E6%B6%B2%E7%9A%84%E6%B0%A8%E5%9F%BA%E9%85%B8+%E6%B6%B2%E7%9B%B8%E8%89%B2%E8%B0%B1&btnG=Google+%E6%90%9C%E7%B4%A2&aq=f&aqi=&aql=&oq=')

amelican_beauty[使用道具]
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发表于 2011-3-3 10:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

难道你要做的实验没有标准吗？开始做只有按照标准做，等你对HPLC了解了再考虑方法的开发与优化

yalefield[使用道具]
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发表于 2011-3-3 10:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

找篇文献或者让安家给你个方法吧，液相测氨基酸色谱条件挺苛刻的，不好分。。。。

lvmaomao[使用道具]
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发表于 2011-3-3 10:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #1 luolei68 的帖子

楼主看一下这几个资料也许对你会有帮助。

氨基酸分析
cuturl('http://www.antpedia.com/?uid-47530-action-viewspace-itemid-128241')

18种天然氨基酸分析
cuturl('http://www.antpedia.com/?uid-47530-action-viewspace-itemid-128243')

opa柱前衍生法测定饲料中的氨基酸含量
cuturl('http://www.antpedia.com/?uid-47530-action-viewspace-itemid-128242')

yueya9113[使用道具]
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发表于 2011-3-3 13:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

查文献，一般的条件都查得到的

shendongkj[使用道具]
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