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标题:【求助】高手分析，pcr怎么会这样？

克隆鱼[使用道具]
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发表于 2015-3-11 14:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】高手分析，pcr怎么会这样？


pcr扩增出目的条带，但是条带很弱，切胶回收鉴定后，再拿回收产物做模板进行pcr扩增，但是条带没有，白白的一片，不知是什么原因？请帮忙分析
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wood533[使用道具]
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发表于 2015-3-11 14:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是片段没有切出来吗
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eor[使用道具]
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发表于 2015-3-11 14:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
第一次条带弱是扩出来的浓度低 第二次白白一片那只能是目的片段被降解了 taq酶的量 引物的特异性 循环了几次 这些都是原因
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okhaha[使用道具]
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发表于 2015-3-11 14:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

模板浓度太高
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hustwb[使用道具]
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发表于 2015-3-11 14:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没遇到过，会不会是浓度太大了，跑不开呢？
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发表于 2015-3-11 14:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
点样孔附近为什么会这么亮？
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发表于 2015-3-11 14:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

“条带很弱，切胶回收鉴定后”怎么做的鉴定？？？？  若是直接你认为的切胶然后   再拿回收产物做模板进行pcr扩增，但是条带没有。只能说明你的回收不成功甚至于没有回收到模版。  进行的PCR 也只是空白的，所以点样孔会是dNTPs混合物或是粘链物。经过染色点样孔就是超级亮。
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克隆鱼[使用道具]
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发表于 2015-3-11 14:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回收后跑胶，目的带大小对，25微升的体系能p出来，放到50微升就p不出来了。模板浓度高，之前做过浓度更高的照样能p出啊，这是回收产物。


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2015-3-11 14:30
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发表于 2015-3-11 14:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
八楼右边两个样是回收产物吗？看起来浓度不低，没有必要再做PCR了吧
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7437654[使用道具]
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发表于 2015-3-11 14:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 克隆鱼 于 2015-3-11 14:30 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

回收后跑胶，目的带大小对，25微升的体系能p出来，放到50微升就p不出来了。模板浓度高，之前做过浓度更高的照样能p出啊，这是回收产物。

如果你给的图片是PCR出目的片段的。那么目的片段够亮了，浓度肯定没问题。  
你是不是先前PCR一次目的片段，然后电泳，再切胶，回收，又去PCR目的片段？第二次的PCR 就出现点样孔极亮的图了 ？
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