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标题:【求助】CR结果都是拖带是什么原因

coolcool[使用道具]
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发表于 2015-3-11 14:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】CR结果都是拖带是什么原因


最近做pcr扩基因，其中一个基因一直出现的是拖带，是什么原因呢？还求各位有经验的前辈给分析下？
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831226[使用道具]
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发表于 2015-3-11 14:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的那个marker是正常的 应该不是胶不好 考虑目的片段被降解了
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wanglaoshi[使用道具]
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发表于 2015-3-11 14:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果其他的都是好的的话，那么说明你的体系没问题，要么考虑模板降解，或者太浓，还有引物问题，引物没问题的话，确定pcr程序，在没问题就把引物做个梯度，要再不行就重新提模板
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nikonun[使用道具]
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发表于 2015-3-11 14:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的引物和模板是不是反复冻融了？
反复冻融会导致模板和引物发生降解，引物和模板最好是分装后冻存，如果最近一直使用可以放4℃冰箱，保存一年没有问题
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bongte[使用道具]
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发表于 2015-3-11 14:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不是楼上的原因就是引物特异性太差，重新设计引物或提高退火温度试试
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12xunmei[使用道具]
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发表于 2015-3-11 14:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

很有可能是引物特异性不高，我曾经遇到过。
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coolcool[使用道具]
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发表于 2015-3-11 14:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 nikonun 于 2015-3-11 14:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

你的引物和模板是不是反复冻融了？
反复冻融会导致模板和引物发生降解，引物和模板最好是分装后冻存，如果最近一直使用可以放4℃冰箱，保存一年没有问题 ...

引物和模板天天用着，放-20度的，用不多久。
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vera+[使用道具]
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发表于 2015-3-11 14:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
应该是引物问题，设计估计不对
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xue258[使用道具]
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发表于 2015-3-11 14:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
拖尾的原因太多了。两方面吧。
1、看你的胶、缓冲液。判断依据如果MARKER很清晰，说明是原因（2)。否则都有可能。
2、那就是从你的PCR结果的产物分析了。楼上都有提到过的引物的特异性不好、退火的温度不是最优的、循环次数、dNTP的浓度，Mg离子的浓度都会有影响。总之一句话可能造成PCR的非特异性产物过多的都会拖尾。
当然也有可能是你操作的原因：上样时样品漂了、电压太高、电泳缓冲液TAE或者TBE的污染、胶的浓度大小、还有可能是你泡EB的时间过长，太多了自己对照下吧。
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TAT[使用道具]
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发表于 2015-3-11 14:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也遇到过这样的情况，我做了一个退火温度的梯度，发现降低了2度反而更好了，也要换换引物
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