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标题:【求助】PCR条带全是拖带是什么原因，marker正常

ilovegaga[使用道具]
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发表于 2015-3-11 14:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】PCR条带全是拖带是什么原因，marker正常


pcr全是拖带，还有什么都没有是什么原因，marker正常，请高手指点！谢谢！


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2015-3-11 14:58
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发表于 2015-3-11 14:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没扩增出来，杯具
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发表于 2015-3-11 14:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

降解了吧。。。
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发表于 2015-3-11 14:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的也出现了类似情况
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发表于 2015-3-11 15:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

模板可能有降解，建议避免反复冻融，放置时间不能太长。
抽提RNA时有污染，包括基因组DNA污染和蛋白质污染，需重做抽提。
提高退火温度，减少非特异性扩增。
减少循环次数，减少非特异性扩增。
电泳缓冲液时间太长，ph值和盐离子浓度明显改变。
电泳时电压不能太高，8V/cm。
一般来讲，基于promega和TaKaRa的PCR反应体系中，Mg和dNTP的浓度是相匹配的，不需改动
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发表于 2015-3-11 15:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
物二聚体都么，估计是你配制的反应液有问题或是模板什么的不行，要么降解要不没加
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发表于 2015-3-11 15:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

该加的都加了哎，在筛选引物，不知道是什么原因
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发表于 2015-3-11 15:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 TNT 于 2015-3-11 15:01 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

模板可能有降解，建议避免反复冻融，放置时间不能太长。
抽提RNA时有污染，包括基因组DNA污染和蛋白质污染，需重做抽提。
提高退火温度，减少非特异性扩增。
减少循环次数，减少非特异性扩增。
电泳缓冲液时间太长，ph值和盐离子 ...

您说Mg离子和dNTP一般都是匹配的，那一般都是多大浓度的
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wood533[使用道具]
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发表于 2015-3-11 15:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做了一个周，和你出现的问题也一样。我今天重新做了一次PCR，再看情况了。
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发表于 2015-3-11 15:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能是降解了，或是退货温度不行，引物的结合力不强。
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