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标题:【求助】PCR条带全是拖带是什么原因，marker正常

wood533[使用道具]
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发表于 2015-3-11 15:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我重新做了一次PCR，再以一次PCR为模板做二次PCR，结果没有条带拖尾现象了
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wood533[使用道具]
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发表于 2015-3-11 15:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看来是模板降解了
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wood533[使用道具]
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发表于 2015-3-11 15:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我重新用了新的一次PCR产物为 模板就没有出现拖尾了
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mod=8048[使用道具]
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发表于 2015-3-11 15:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
遇到这个问题的话先从PCR条件下手，特别是退火温度。
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vera+[使用道具]
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发表于 2015-3-11 15:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果是怀疑核酸降解了的话，就扩大反应体系，比如10ul扩大到20ul，我每次10ul出现这样情况时，扩大体系时，都会得到很好的结果！你不妨试一试。
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发表于 2015-3-11 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
能不能告诉一下这是做的什么实验，最好具体一点
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xingyi08[使用道具]
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发表于 2015-3-11 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉着很可能没扩出来或是没加loading而放太久都降解了
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qhyu[使用道具]
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发表于 2015-3-11 15:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般原因很多 需要慢慢找 用排除法进行PCR 总会找到原因的
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zwsyrt[使用道具]
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发表于 2015-3-11 15:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这种情况一般不是电泳的问题，marker正常说明这点。你的PCR出问题，不知道你要扩增多长的基因，可能扩增时间不够。PCR扩增买PCR Mix最好了。只要Tm、模版、引物量控制优化即可。
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ritou1985[使用道具]
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发表于 2015-3-11 15:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

非特异扩增或降解了
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