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标题:【求助】为什么我PCR后琼脂糖电泳的条带都是往上托带？

woshi[使用道具]
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发表于 2015-3-11 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】为什么我PCR后琼脂糖电泳的条带都是往上托带？

大家好，我最近跑电泳老是跑成一整条涂布带，会托的长长的，我的目标条带不明显或者说没有，这是怎么回事啊？摸索了很久了，没找到原因，很痛苦。


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toy[使用道具]
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发表于 2015-3-11 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1.跑胶的电压太大~！
2.样品有些降解！
3.配的胶不均匀！
看看这三个原因。
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greenbee[使用道具]
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发表于 2015-3-11 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
退火温度和引物特异性是关键
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bangqi_k[使用道具]
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发表于 2015-3-11 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的模板有没有问题？还有就是引物的特异性
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发表于 2015-3-11 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
拖带原因往往由于酶量过多或酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多引起。
    其对策有：①减少酶量，或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。③适当降低Mg2+浓度。④增加模板量⑤减少循环次数。
试试看，等待你的好消息
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bamboo16[使用道具]
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发表于 2015-3-11 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这是没有P出来东西吗！退火温度很关键！
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发表于 2015-3-11 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 sistis 于 2015-3-11 16:30 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
拖带原因往往由于酶量过多或酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多引起。
    其对策有：①减少酶量，或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。③适当降低Mg2+浓度。④增加模板量⑤减少循环次数。  ...

您好，我做的是不对称PCR,我的模板本身就是82bp的寡居核苷酸。以前做的很顺利，从某一天开始就再也做不出来了。
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woshi[使用道具]
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发表于 2015-3-11 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 bamboo16 于 2015-3-11 16:30 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
这是没有P出来东西吗！退火温度很关键！

恩  没有我的目标条带
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woshi[使用道具]
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 小中大


QUOTE:
原帖由 toy 于 2015-3-11 16:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
1.跑胶的电压太大~！
2.样品有些降解！
3.配的胶不均匀！
看看这三个原因。

这3点，我倒觉得没问题。
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阿凡提[使用道具]
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 小中大
应该跑不出来了，你重新做吧
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