【求助】HindIII的保护碱基

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标题:【求助】HindIII的保护碱基

vera+[使用道具]
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发表于 2015-3-11 16:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

RT，我现在在设计引物，往酶切位点外面加入保护碱基，但是HindIII的保护碱基就不知道加几个了，我们实验室的人说几个都可以，但是我看TAKARA的书上说3个CCC保护碱基时，才有酶切效果，我现在很是混乱。想问问，
1、HindIII的保护碱基到底加几个？
2、如果是三个的话，一定要是CCC吗？
3、加入保护碱基，是AT还是CG？需要考虑整个酶切位点的引物的GC含量吗？

谢谢啦，我现在比较急

okhaha[使用道具]
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发表于 2015-3-11 16:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

有takara的产品目录可以参考一下，
一般的酶切位点加三个碱基就都没问题了，保护碱基最好用GC,不用AT，稳定一些
我没考虑过GC含量之类的，只要别是很多个G或C连起来就行

sr9971[使用道具]
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发表于 2015-3-11 16:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

保护碱基可以随便加，只要和你的模板匹配上，符合引物设计的原则既可！没有必要去较真！