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标题:【求助】反转录酶AMV和M-MLV有什么不同？

小游abc[使用道具]
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发表于 2015-3-11 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】反转录酶AMV和M-MLV有什么不同？


最近做RTpcr要购买反转录酶，最常用的是AMV和m-mlv两种，但不知道该选择哪一种？？它们有什么区别？
我只知道它们的种源不同反应温度不同，都具有RNase H活性。在第一链合成之后要不要加RNase H来消化杂合链中的RNA？
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发表于 2015-3-11 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

m-mlv比AMV好
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发表于 2015-3-11 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

m-mlv是mutation过的MLV，RNase H活性弱。AMV不适合太长的片段，RNase H活性强。
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发表于 2015-3-11 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那么在使用M-MLV反转录后得到的是DNA-RNA杂合链，是不是必须用RNase H来酶解杂合链中的RNA啊？？
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发表于 2015-3-11 17:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
二者都需要用RNase H来酶解杂合链中的RNA
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发表于 2015-3-11 17:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

二者都可以直接作RT-PCR，我用MMLV扩增长度比AMV长得多。另外。一般MMLV用37度，AMV用42度。
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发表于 2015-3-11 17:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢各位啦！！
我们实验室多用AMV，MLV用的比较少。但是用前者我们实验室他们都不用RNaseH的，不知道会有什么影响！我只是做一个普通的RT-PCR不做cDNA库，只用AMV应该没什么问题吧？
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发表于 2015-3-11 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也用的是MMLV
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发表于 2015-3-11 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用的是AMV，我们实验室也都用它。我的情况和你差不多，也是只做RT-PCR，现在感觉没什么影响，但不同的情况还需要具体分析，会有很多因素影响，这只是我个人认为，你可以先试试。
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小游abc[使用道具]
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发表于 2015-3-11 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

恩 谢谢大家了
我过几天再做，先借了点cDNA做PCR  哈哈
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