小中大二、湿热灭菌法的主要设备
湿热灭菌法的主要设备是灭菌釜,灭菌釜种类很多,性能差异也很大,但其基本结构大同小异,所用的材质为坚固的合金。现在国内很多企业使用的方型高压灭菌釜,能密闭耐压,有排气口、安全阀、压力和温度指示装置。带有夹套的灭菌柜备有带轨道的格车,分为若干格。灭菌柜顶部装有压力表二只,一只指示蒸汽夹套内的压力,另一只指示柜室内的压力,两压力表中间为温度计。灭菌柜的上方还应安装排气阀,以便开始通入加热蒸汽时排除不凝性气体。近年来,有些制药企业已经开始采用具有抽真空能力及Fo控制的蒸汽灭菌釜,目前国内采用的进口灭菌釜主要有二种:一种以蒸汽为灭菌介质的旋转式灭菌釜,如奥地利的HDRR009.20/IS,另一种以过热水作介质的喷淋式灭菌釜,如意大利FEDEGARI公司的FOW5—500。进口灭菌釜的主要优点是批次量较大,温度控制系统准确度及精密度较好,产品灭菌过程中受热比较均匀。
灭菌釜的基本灭菌程序为:
装瓶 → 升温、进蒸汽置换空气 → 灭菌 → 排汽→ 预热水冷却 →卸瓶。
三、热压灭菌器使用的注意事项:
1、必须将灭菌器内的空气排出。如果灭菌器内有空气存在,则表上所表示的压力是蒸汽和空气二者的总压而非单纯的蒸汽压力。结果压力虽然达到预定水平,但温度达不到。若表压与温度表指示不一致,则有可能空气没有排尽,也可能压力表失灵,也可能是不饱和蒸汽,应找出原因加以解决。
2、灭菌时间必须由全部药液真正达到所要求的温度时算起,湿热灭菌时的预热时间(升温时间)虽可较干热时间的短,但测定和缩短预热时间的重要性,也决不次于干热灭菌。例如250ml —500ml玻瓶输液,预热时间一般为15~30分钟,多者可达45分钟。
3、灭菌完毕后,停止加热,一般须使压力表所指示的压力逐渐下降到零后,才能放出锅内蒸汽,使锅内压力与大气压相等后,稍稍打开灭菌锅,待10~15分钟后,再全部打开。这样可避免内外压力差太大而使物品冲出锅外和使玻璃瓶爆裂。这点必须注意以免发生工伤事故。为了缩短灭菌周期,也有往灭菌器内盛装有溶液的封闭容器喷雾冷却水,加速冷却。以水温18℃,雾滴大小80μm的喷雾时的冷却效果最大,过冷过粗的喷雾将引起瓶子的爆破。对于灭菌后要求干燥但又不易破损的物料,灭菌后立即放出灭菌器内蒸汽,以利干燥。
四、流通蒸汽灭菌法和煮沸灭菌法
流通蒸汽灭菌法是在不密闭的容器内,用蒸汽灭菌,压力与大气压相等,即100℃的蒸汽灭菌。目前我国药厂生产注射剂,特别是1~2ml的注射剂及不耐高温的品种,基本上都采用此法,煮沸灭菌法就是把安瓿或其它物品放入水中煮沸灭菌。流通蒸汽灭菌与煮沸灭菌,一般是100℃30分钟至60分钟。此法不能保证杀灭所有芽孢,例如破伤风杆菌等厌氧性细菌的芽孢,故制备过程中要尽可能避免污染。可用热压灭菌器开启排汽阀进行灭菌。在农村或野战条件下亦可采用蒸笼来灭菌,若在高原地区,由于水的沸点降低,因此在水中常加入1~2%碳酸钠,5%苯酚等以提高水的沸点;但也有用延长灭菌时间的方法来解决的。一般每升高300公尺,延长灭菌时间20%。此法对增殖型微生物的灭菌效果大,但不能保证杀灭芽孢。
五、低温间歇灭菌法
此法是将待灭菌的制品,用60~80℃加热1小时,将其中的细菌繁殖体杀死,然后在室温或孵卵箱中放置24小时其中芽孢发育成繁殖体,再第二次灭菌。连续操作三次以上,至全部芽孢消灭净为止。此法适用于必须用热法灭菌但又不耐较高温度的制剂或药品。缺点是时间长,消灭芽孢的效果不够完全。应用本法灭菌的制剂或药品,除本身具有抑菌力者外,须加适量抑菌剂,以增加灭菌效力。
以上几种灭菌方法为湿热灭菌法的几种灭菌方式,本厂现采用热压灭菌法和煮沸灭菌法,如口服液车间采用对药液采用煮沸灭菌40分钟,对C型瓶、瓶盖采用121℃20分钟或105℃30分钟灭菌,如果口服液采用最终灭菌时,灌封完成的药品在规定时间内采用105℃30分钟灭菌。
第三节 其他灭菌方法及消毒方法
一、辐射灭菌法
以放射性同位素(60C0或137Cs)放射的γ射线杀菌的方法。射线可使有机化合物的分子直接发生电离,产生破坏正常代谢的自由基,导致微生物体内的分子化合物分解。辐射灭菌的特点是不升高灭菌产品的温度,穿透性强,适合于不耐热药物的灭菌,医疗器械、高分子材料、包装材料等灭菌。灭菌剂量一般可用2.5×104GY(戈瑞)。此法已为《英国药典》(1998),《日本药局方》十三版所载。我国有些企业亦有用60C0对某些中药和医疗器械进行灭菌。辐射灭菌,制备费用高,对某些药品可能产生药效降低,产生毒性物质或发热物质,使用辐射灭菌还应注意安全防护措施。
二、紫外线灭菌法
是指用紫外线照射杀灭微生物的方法。一般用于灭菌的紫外线波长是200~300nm,灭菌力最强的波长是253.7nm。紫外线作用于核酸蛋白促使其变性,同时空气受紫外线照射后产生微量臭氧,从而起共同杀菌作用。紫外线进行直线传播,可被不同的表面反射,穿透力微弱,但较易穿透清洁空气及纯净的水。因此本法适用于照射物体表面之灭菌、无菌室的空气及水的灭菌;不适用于药液的灭菌、固体物质深部的灭菌;普通玻璃可吸收紫外线,因此装于玻璃容器中的药物不能用此法灭菌。紫外线对人体照射过久,会发生结膜炎,红斑及皮肤烧灼等现象,故一般在人入室前开启紫外线灯1~2小时,关闭后人才进入洁净室。如果必须在人进去后仍要开紫外线灭菌,则人的皮肤及眼睛应有有效的防护措施。一般在6~15m3的空间可装置30瓦紫外线灯一盏,离地面2.5~3m为宜。
用紫外线照射灭菌时要注意下列问题:
1、紫外线的杀菌力,随使用时间增加而减退,一般使用时间达到额定时间70%时应更换紫外线灯管,以保证杀菌效果。国产紫外线灯平均寿命一般为2000h。
2、紫外线的杀菌作用随菌种不同而不同,杀霉菌的照射量要比杀杆菌大40~50倍。
3、紫外线照射通常按相对湿度为60%的基础设计,室内湿度增加时,照射量应相应增加。
4、紫外线灭菌效果与照射的时间长短有关,这需要通过验证来确定照射时间。
5、紫外照射灯的安装形式及高度,应根据实际情况,参考使用说明决定。