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标题:[未解决]96孔板染色

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
zuzu123[使用道具]
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发表于 2011-3-10 14:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

96孔板染色

我想用trypan blue 直接加入96孔板对细胞进行染色，分析死亡率。可是未经任何处理的细胞总是死亡率很高，请高手指教！
我的具体步骤是：完全吸出细胞培养液，加入40ul台盼蓝燃料，染色3-5分钟后完全吸出染料，镜下观察。会有达到30%的死亡率。用的培养基是商业化的不完全培养基，没孔中150ul！
请高手不吝赐教！感激不尽！
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  • miracle   2011-3-10 16:15  可用分  +2   鼓励新手发起话题交流！欢迎常来！ ...
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aa1380[使用道具]
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发表于 2011-3-10 17:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是不是细胞接种密度太大或细胞的生长速度过快？
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  • miracle   2011-3-11 10:46  可用分  +3   感谢您的应助解答！
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发表于 2011-3-11 02:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢回复！ 我每孔只有10000个细胞，贴壁后换不完全培养基，培养5个小时候观测，应该不会密度太大或生长过快吧！
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  • miracle   2011-3-11 10:46  可用分  +2   积极回复交流！
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chenxiaohu[使用道具]
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发表于 2011-3-11 17:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
使用台盼蓝的方法不对吧。
确保是正常的工作浓度。
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zuzu123[使用道具]
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发表于 2011-3-12 01:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我试用的台盼蓝是0.4%。使用时直接将培养基吸干净，然后加入染料染3-5分钟，全部吸走染料后观察。这样有什么问题吗？
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ccf335[使用道具]
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发表于 2011-3-12 12:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是不是胎盘蓝用前没有稀释啊？
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zuzu123[使用道具]
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发表于 2011-3-15 12:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
0.4% 的台盼蓝。根据大家的回复，我是不是可以说，通常情况下，我的操做是没有问题的，但是出于某种原因，我细胞的死亡率过高？
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