食品分析者

做标曲时我按如下步骤做的，怎么做最后三个点都是老飘，总是做不出来：
准确称取衡重葡萄糖0.0501G溶于50ml容量瓶定容（1.0mg/ml）
准确移取对照标准液0.75、1.5、2.25、3.0、3.75、4.5ml于25ml具塞试管中，加5%苯酚试剂5.0ml(苯酚配置前经精制)混匀，快速延管壁加浓硫酸15.0ml混匀，加水定容，室温下放置15min置40℃水浴中10min取出后静置15min，以蒸馏水同法做空白，491nm下测吸光值！~！

这个方法本来重现率就不好，写标准的人也比较操蛋，反正我当时怎么做线性都不好，放弃吧。

“准确移取对照标准液0.75、1.5、2.25、3.0、3.75、4.5ml于25ml具塞试管中”你这体积也选的挺另类的，尽量搞成整数用移液管试试吧，有的时候一夜强是不准的。

哥们，我这两天也在做粗多糖的测定（葡聚糖计），在实验过程中发现以下问题，希望能给你以提示：
1、葡聚糖干燥方法（干燥温度过高会发生醛糖反应）影响葡聚糖的纯度；
2、苯酚和硫酸的量或者纯度影响葡聚糖分解为葡萄糖的效率；
3、排除试剂问题后，考虑实验操作、实验仪器（分光光度计）的问题，比如操作比色皿是否干净、移液是否操作规范

坐标曲的话还是用移液管吧，枪是很不准的，除非你之前校正过，还有，标曲我一般做0.1,0.2.。。。0.9，R方一般都两个9以上，我们这里的标曲小王子，从不做平行，每次都三个9

1、葡萄糖要干
2、苯酚重蒸
3、硫酸要求要高

我做标准曲线的0.9998，一次成功
先了解原理，怎么去尽可能减小误差就可以做好了
葡萄糖的标准溶液先用容量瓶做好吧
1ml 葡萄糖溶液+1ml纯净水+2ml苯酚溶液+5ml硫酸---摇匀，热水浴15ml，冰水浴15ml

我测的是食用菌中粗多糖，就按照国标测的，只要照上面做，就能做出三个9，
葡萄糖：100mg/L，苯酚：5%，
葡萄糖：0      0.2      0.4     0.6     0.8     1.0
蒸馏水：1.0   0.8      0.6     0.4     0.2      0
   苯酚：1.0  1.0     1.0      1.0     1.0      1.0
浓硫酸：5.0    5.0     5.0      5.0     5.0     5.0
都是ml，硫酸要在苯酚加入后，快速加入，静置10min，摇匀，放入30度水浴20min,之后在室温下测定OD值，就可以了，我刚做的，0.9996，已经可以用了

我所测过的是虫草中的多糖，与你不同的是添加试剂的量及反应时间不同，浓硫酸加入量是5ml，反映条件是35℃30min。我说一下你试验我疑惑的地方，你为什么不是把葡萄糖溶液稀释到适当的倍数测，我觉得你反应结束后定容，会有较大误差。

浓硫酸和苯酚对实验影响很大，且生产日期越近越好。祝顺利~

反应完成后你试一下把反应后的溶液放到冰水中凉至室温试试。以前我用蒽酮硫酸做的很好