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标题:[未解决]想用苯酚-硫酸法测定多糖求助~

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today@[使用道具]
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发表于 2015-3-14 14:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

想用苯酚-硫酸法测定多糖求助~

我想用苯酚-硫酸法测定多糖，以葡糖糖做标曲，可是看了很多资料方法不一，药品用的都大约是6%重蒸酚、浓硫酸。可是在实验操作上有出入。
有如下：1、取样2ml+1ml 6%重蒸酚，摇匀再加入5ml浓硫酸摇匀，室温放置20min,490nm测吸光值。
     2、取样2ml+1ml 6%重蒸酚摇匀，加入5ml浓硫酸摇匀沸水浴15min，快速冷却，490nm测吸光值。
     3、...
我想问一下有没有一个学术上公认的标准?哪个方法更准确呀？
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未完~待续[使用道具]
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发表于 2015-3-14 14:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一般为第一种，一般该反应需要一定时间，但也不能太长，不然糠醛分解

若能准确控制水浴的反应温度和时间，理论上是最好的
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发表于 2015-3-14 14:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
重结晶最好，但也有反映说，购买的分析纯就可以
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发表于 2015-3-14 14:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
苯酚被氧化以后测定就会出问题，在使用苯酚前可以看看其是否变红，要是变红就是被氧化成苯醌了，一般新买的分析纯苯酚应该没有问题。
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发表于 2015-3-14 15:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
苯酚硫酸测得是总糖，然后我用DNS测出还原糖，多糖用总糖减去还原糖
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发表于 2015-3-14 15:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也是用苯酚硫酸法测定提取物中总糖含量苯酚为啥不到40度就成晶体了，还能用吗？
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发表于 2015-3-14 15:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
应该是硫酸不纯，不过你每次都用一个牌子，要误差都有误差，没事。
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发表于 2015-3-14 15:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
加硫酸的快慢会影响颜色的，一般5ml边振荡边加4-5s差不多，越快颜色越深
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不化妆的lay[使用道具]
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发表于 2015-3-14 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1、苯酚不用重熏蒸，分析纯就可以。有时苯酚因为氧化而有点红，没有关系，及即使空白有及其轻微的红色，也没关系，因为最后是当成空白扣除的。
2、反应温度，常温放置我没试过。但是我一直是用沸水20min，线性情况非常好，有时可达0.999以上。而且在高温下，酸水解多糖更彻底。
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