小中大请教,问题严重了
各位,小弟有一问题想请教:
年前用大环抗生素的手性柱分离一个带氨基的化合物(PKa=9.6),TNND,用文献上的报道去做,流动相为
甲醇:乙腈:TEA(v/v/v)=80:20:0.05,走了5针标准品(溶于甲醇,c=200ppb),峰性和分离度都非常好,年后继续做,一样的条件一样的化合物,可是死活不出峰,想来想去,找到色谱柱的说明书,发现允许的PH使用范围是3-7,把配制的甲醇乙腈TEA流动相测了一下PH值,11左右,天哪。接下来用甲醇冲了一整夜,用说明书上,推荐的再生色谱柱的流动相NH4OAC(50mM )/乙腈=50:50冲了3-4h,结果还是不出峰,接下来用水:甲醇=90:10去冲。今天想看看有没有效果,可是不敢再用那个PH=11的甲醇乙腈TEA流动相了,就用另一篇文献上的甲醇:TEA:HAC=100:0.2:0.1(流动相PH=7.3左右)去走样,发现跟文献上报道的一样在10min左右有两个峰,不过峰面积十分十分小(只有0.003左右的信号,年前正常信号在0.13左右),很郁闷啊~~~~
有几个问题:
(1)为什么会出现不出峰或者出峰非常非常低的情况啊?
(2)接下来如何去处理色谱柱?用什么流动相去恢复?
(3)问过一些老师,分析色谱柱可能被碱性太强的TEA给覆盖了活性点,应该在酸性环境下去恢复。
我想听听各位专家的意见,帮帮忙~~~~~~~~