液相色谱做酯类化药分析，泵压力非常不稳定？

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标题:[未解决]液相色谱做酯类化药分析，泵压力非常不稳定？

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xiongwei397[使用道具]
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发表于 2011-3-18 10:51 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位，本人正用安捷伦1200液相色谱做一个酯类化药的分析，色谱柱：150mm*4.6mm，5um粒径，流动相A：1.3g磷酸氢二铵，4.0g四丁基氢氧化铵溶于900ml水中，用磷酸调pH值为7.5，用的是娃哈哈小瓶纯净水。流动相B为醇甲醇，两者走梯度。泵压力非常不稳定，见下图。流动相过滤后充分脱气。之前也跟安捷伦工程师沟通过，问题没得到解决，现在不知道问题出在哪里，如果有人遇到了类似的问题，或者有什么建议的话，欢迎指导，谢谢。

[ 本帖最后由 miracle 于 2011-3-18 17:30 编辑 ]

smmdcryctc[使用道具]
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发表于 2011-3-19 09:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

为什么会有两个尖尖的峰，你问过么？

qushaosol[使用道具]
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发表于 2011-3-19 09:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你可以把吸流动相的头用30%的硝酸或50%甲醇超声一下，然后把流动相超声5~30min，试一下~

BridgetJones[使用道具]
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发表于 2011-3-19 09:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

是不是样品处理的问题？

ngoir[使用道具]
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发表于 2011-3-19 14:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我觉得是流动相的问题，可能要调整一下的。

dragon5[使用道具]
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发表于 2011-3-19 14:15 资料个人空间短消息加为好友

小中大

建议楼主采取排除法来解决问题：
首先换纯水纯甲醇的流动相体系，将A通道用纯水清洗干净后，再走这个梯度，如果没有气泡说明不是仪器有问题，相反可能是仪器有问题了；
如果确认仪器米有问题，再将流动相A缓冲液跟甲醇等比例混合看看是否有结晶析出来或者产生大量气泡，甲醇跟水混合会放热，不知道对你这个流动相体系是否有影响？

maomi520[使用道具]
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发表于 2011-3-21 11:53 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果能贴上方法的timetable，把纵坐标调成压力单位就更好了
分段排除吧，先卸掉柱子，分别用你的两种流动相跑一下，没问题的话按你的方法跑一针，看看是不是还是会出现压力不稳。
如果还是不稳，再去考虑流动相的问题，比如气泡，比如混合产热。更换流动相为纯甲醇和纯水，分别100%跑一下，然后互换再跑一下。
还是有问题的话就要怀疑是泵的问题了

xiongwei397[使用道具]
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发表于 2011-3-21 11:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们用的是玻璃的滤头，培训的时候老师说千万不能超，否则就报废了

我们之前试过了用纯水和纯甲醇走相同的梯度，压力正常，安捷伦的工程师也排除了仪器的问题。梯度开始时是40%的缓冲盐，保持5min，后缓冲盐慢慢将到10%。不过将缓冲盐和甲醇等体积混合倒是没观察过有没有盐析出，虽然甲醇和水混合会放热，还产生很多气泡，但是没有办法，这个是药典上的方法，再说不加缓冲盐，甲醇和水混合液会有放热和产生气泡，但是系统压力是正常的。谢谢你的建议

dragon5[使用道具]
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发表于 2011-3-21 11:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我见过的甲醇跟水少量混合时产生的气泡很少的几乎难发现，偶是担心会不会因为放热导致流动相中添加的氨类大量挥发，当然请按可能性可不太大。

如果实在影响分析结果的话还是改方法吧，只要你自己建立的方法比药典方法有优势，验证通过就可以的。