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你说的太大了,具体一点儿,最好具体到某个样品,网上转载了一篇文章,希望能沾边。祝你好运!
高效液相色谱-串联质谱法测定饲料中九种磺胺类药物的残留量
陈文慧
(海南出入境检验检疫局,海口570311)
摘 要:建立了饲料中九种磺胺类(SAs)药物残留量的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)测定方法。试样经乙腈提取,碱性氧化铝柱净化处理。采用LC-MS/MS选择反应监测正离子模式测定,同时对饲料中的九种SAs进行定性和定量。在0 ~200μg/L范围内,九种SAs的线性相关系数( r)均大于0·9975。通过实际样品的添加回收实验,方法的检出限为2 mg/kg, 3个添加水平的回收率范围为76·0%~114·0%,相对标准偏差小于11%。方法适用于磺胺类药物在饲料中的残留检测和确证。
关键词:磺胺类药物,饲料,液相色谱-质谱/质谱
中图分类号: O657·63 文献标识码: A 文章编号: 1000-0720(2010)09-052-05
测定磺胺类残留量常用的方法包括酶联免疫法、高效液相色谱-紫外检测法[1-5]和高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)[5, 6]。HPLC-MS/MS的抗干扰能力强,检出限低,无需强调分离,已逐渐作为SAs残留检测的首选方法。目前已发表的关于测定SAs残留的方法几乎都集中在禽肉类产品、水产品和奶制品上。饲料样品的性质决定了一般针对禽肉等产品的样品前处理方法不适用于饲料样品。饲料中SAs的测定,已有国家标准[3, 4]。与标准相比,本方法适用于检测的药物品种更广。
本文通过比较饲料中SAs残留的不同提取方法,最终利用乙腈溶液溶解并提取SAs分析物,碱性氧化铝柱净化后,采用HPLC-MS/MS同时测定九种SAs残留,检出限达到2 mg/kg。
1 实验部分
1·1 仪器与试剂
高效液相色谱-串联质谱仪(美国ABI公司);组织捣碎机;孔筛(孔径1 mm);电子分析天平AE240;具塞锥形瓶(150 mL); IKA MS3 digital旋涡混合器; 320R冷冻离心机;氮吹仪;碱性氧化铝小柱(Cleanert Alumina-B-SPE, 1000 mg6mL,用前分别用10 mL乙腈淋洗。保持柱体湿润)。
乙酸铵(色谱级);磺胺嘧啶( sulfadiazine,SD)、磺胺甲基嘧啶(sulfamerazine, SMR)、磺胺二甲基嘧啶(sulfamethazine, SDD)、磺胺甲氧哒嗪(sulfamethoxypyridazine, SMP)、磺胺间甲氧嘧啶(sulfamonomethoxine, SMM)、磺胺甲噁唑(sul-famethoxazole, SMZ)、磺胺二甲氧嘧啶(sulfadim-ethoxine, SDM)、磺胺喹噁啉(sulfaquinoxaline,SQX)、磺胺氯哒嗪( sulfachloropyridazine, SCP)等9种磺胺类药物标准品(纯度≥98·0% );甲醇、已腈、甲酸、冰乙酸为(色谱纯);水为GB/T6682规定的一级水;其它试剂均为国产分析纯。
1·2 溶液的配制
定容液:准确移取3 mL冰乙酸,加入250 mL乙腈,再用水定容至1000 mL,混匀,过0·2μm有机系微孔滤膜,脱气,备用。
标准储备液:分别准确称取磺胺嘧啶、磺胺甲嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲氧哒嗪、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉和磺胺甲噁唑10·0 mg(准确至0·1 mg),置于25 mL容量瓶,用少量甲醇溶解,并用甲醇定容至刻度,混匀,浓度为400μg/mL浓度。该标准储备液置于4℃冷藏避光保存,保存期为六个月;混合标准储备液:分别准确量取适量的九种磺胺类药物标准储备液,用甲醇稀释成50μg/mL的混合标准储备液,该混合标准溶液置于4℃冷藏避光保存,保存期为3个月;混合中间标准溶液:准确量取适量的混合标准储备液,用甲醇稀释成1μg/mL的标准中间液,该中间标准溶液置于4℃冷藏避光保存,保存期为3个月;混合标准工作溶液:根据需要准确量取适量的混合中间标准溶液,用定容液配制成适合浓度的的标准工作液。
1·3 样品处理
取有代表性的样品,经粉碎,全部过1 mm孔筛。制样操作过程中必须防止样品受到污染。称取2 g试样(精确至0·01 g),置于具塞锥形瓶中,加入50 mL乙腈,于涡旋振荡器振荡2 min,水浴超声30min。取上清液约5·0mL于带盖离心管, 12 000 r/min高速离心10 min。准确吸取1·0 mL澄清液,加入已加有6 mL乙腈的试管中,于涡旋振荡器振荡30 s。将提取液移入用10 mL乙腈淋洗过的碱性氧化铝小柱,令其自然流速流出。待提取液全部流出后,吹干,用4 mL定容液洗脱,收集洗脱液,过0·2μm有机系微孔滤膜,供液相色谱-串联质谱测定。
1·4 液相色谱-质谱/质谱测定
1·4·1 色谱条件
色谱柱: C18柱, 4·6 mm×150 mm, 5μm,流动相:甲醇(A)和0·50 mmol/L乙酸铵溶液(B);梯度程序: 20% A(0~2min), 20% A~90%A(2~7 min), 90% A~20% A(7~7·5 min),20% A(7·5~12 min);流速: 0·80 mL/min;柱温: 30℃;进样量: 50μL。
1·4·2 质谱条件
离子源:电喷雾离子源ESI,正离子模式;监测模式:多反应监测(MRM);气帘气、雾化气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气;使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求,气帘气(CUR): 0·4 MPa;雾化气(GS1): 0·6MPa;辅助加热气(GS2): 0·7 MPa;碰撞气(CAD): 0·4 MPa;离子源喷雾器电压( IS):5500·0 V;喷雾针温度: (TEM): 450·0℃。其它参数见表1。