食品分析者

我做苯酚硫酸法测定多糖，前几天硫酸用完了，今天买了一瓶新的，可是做实验室发现用刚买的硫酸做时空白都是深红色的样品颜色更深，没法做，稀释十倍才能有差别，请问一下大家又没遇到这样情况，还是我买的硫酸出问题了？

首先，要确定你检测的标准曲线是不是准确的，主要是葡萄糖的含量
操作的时候有几条你需要注意的，这些对你的检测结果影响极大
1、苯酚需要重蒸，配制的苯酚溶液需要妥善保存。
2、样品检测的时候，向样品中加了苯酚溶液需要迅速摇匀，加入硫酸
基本操作：硫酸沿壁加，最好能旋转比色管，让硫酸能均匀的沿壁流下。
3、加完硫酸需要立即摇匀，前提是塞子要配套，不怕烫
热、冷水浴，要准确。

空白的颜色很深，说明你的空白中的苯酚被氧化了
深红是醌（苯酚氧化生成）的颜色
颜色过深的话说明你的酚的难度过大，一般是5%
但是没遇到你说的那么严重，不是深红色的
做的好的时候颜色很浅，颜色深点也有肯能。

不是你买的硫酸的问题，是苯酚或你添加硫酸后苯酚全部被氧化的原因。

你说的这种现象的确很常见，即使同一个人操作，2天检测同一个样品的结果也有很大的差距。
硫酸在本检测方法中的作用是水解多糖，但是高浓度的硫酸也有很强的氧化性，脱水性，试验检测的误差在硫酸这块的有很大。
苯酚在检测中试起到与醛、酮糖结合显色的作用
试验操作中苯酚被氧化显色，肯定是增大检测结果。
但是若果苯酚被氧化，则无法检测多糖是否全部参与显色，结果至少是低于实际值的。
两种情况一加一减，最终的结果很难说

样品+蒸馏水，+苯酚（迅速 摇匀），+浓硫酸（迅速摇匀）
相信你在检测的时候也遇到了，硫酸不同加法的不同显色结果
沿壁--硫酸沉降在底部，可以很明显的看见显色是从不同密度的界面开始生成的
沿壁+旋转比色管---控制硫酸添加速度，可以看到颜色是从比色管壁开始生成，逐渐向中间生成
我个人就觉得旋转比色管沿壁加时，同一位置硫酸浓度增加相对来说较慢，避免了硫酸那多增加过快而增大了其氧化性的副作用。
另外，比色管选用25ml的比10ml的要好些吧，降低液面高度。可以很快的混匀样品。

很可能是硫酸的问题。里面可能有某些杂质干扰了显色。另外在进行实验时试管和用具也应该尽量洗干净。

硫酸的问题，我也遇到过，我的都成深紫色的了，你买的是分析纯的吧，买优级纯就ok了~~

多糖时，一般是用酸水解法测试。

大家好 我也是刚摸索做苯酚硫酸法，但是做了几次每次测的值都差别很大
请问你们做标准曲线时是每次一起加入后测还是一个样一个样的测哦？

我也遇到这种问题。买了优级纯的硫酸，如果：1空白（2ml水+1ml苯酚(5%)+10ml硫酸）显灰绿色；2空白（2ml水+1ml苯酚(5%)+5ml硫酸）则显浅棕色。

我每次加完浓硫酸后就变紫色了，是不是因为硫酸的问题？优级纯好买吗?

硫酸的问题，分析纯的就行，后来我买的北京化工生产的硫酸，就没出现过变成深紫色问题。有优级纯的就更好了，硫酸优级纯和分析纯购买是一样的都得备案比较麻烦。