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标题:【求助】PCR条带弥散的问题

PCR[使用道具]
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发表于 2015-4-1 15:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】PCR条带弥散的问题


质粒为模板，通用引物，退火温度68度，目标带还比较清晰，只是有弥散和非特异带
大家帮我分析一下可能的原因，谢谢！


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2015-4-1 15:06
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yizhi[使用道具]
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发表于 2015-4-1 15:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1、引物特异性不好
2、某一引物加多了，上下游引物的量要一样，实在不行就保持一个引物浓度不变，另外一个引物做个梯度
3、引物发生了降解
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小螺号[使用道具]
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 小中大
1.有弥散退火温度还要摸下
2.有非特异性条带那就是引物的特异性不够好
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黄花菜[使用道具]
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发表于 2015-4-1 15:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1.质粒的浓度一般都很高，作为模版要稀释的。
2.引物浓度的问题
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发表于 2015-4-1 15:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
酶，模版，引物的浓度高都会引起，可以减低试试。
marker也有弥散，是不是DNA胶有问题……
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了了[使用道具]
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 小中大

减低引物量，小幅度提高退货温度，缩短循环数！
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一叶[使用道具]
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发表于 2015-4-1 15:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
对，明显有非特异性扩增，提高退火温度，减少循环次数
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大尾巴[使用道具]
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发表于 2015-4-1 15:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
同意对质粒做梯度稀释
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牙牙[使用道具]
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发表于 2015-4-1 15:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是引物特异性不好，要减低引物量！
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PCR[使用道具]
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发表于 2015-4-1 15:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢大家，问题已经解决
降低了循环数，其他反应条件都没有变
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