【求助】昆虫基因组DNA提取结果，能进行SSR-PCR扩增吗？

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标题:【求助】昆虫基因组DNA提取结果，能进行SSR-PCR扩增吗？

爱老虎游tt[使用道具]
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发表于 2015-4-1 15:53 资料个人空间短消息加为好友

小中大

求高手解答啊~怎么消除下面这些拖带啊？谢谢大家了~

附件

2015-4-1 15:53

20120322.jpg (65.12 KB)

shenkunjie[使用道具]
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发表于 2015-4-1 15:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

RNA降解了，加RNA酶再消化消化。应该没问题，SSR对于基因组DNA质量要求并不太高

爱老虎游tt[使用道具]
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发表于 2015-4-1 15:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢你了哦~还想问一下，现在这种情况下，我再加入RNA酶？提出来的DNA我是加的50微升的TE保存的，那我要加多少RNA酶合适呢？加了以后我再跑电泳看看还有没有拖带情况？如果处理以后没有拖带了，那就可以直接做PCR了吧？

vcve[使用道具]
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发表于 2015-4-1 15:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

再加1uL RNase就行了。不用跑电泳检测，直接PCR就行

boom[使用道具]
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发表于 2015-4-1 15:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

最上面的肯定是DNA，看图片质量还算可以，除了一些样的浓度较小之外。下面的大片大片的肯定是RNA，RNA的量还比较大，应该会影响你的PCR结果。同意楼上的建议，加1-5微升的 RNase, 37度水浴半小时后，或者直接就进行后续的PCR实验，或者将水浴后的样品进行一下氯仿抽提和醇沉淀的纯化步骤，这样得到的纯化DNA样品再跑电泳和PCR

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发表于 2015-4-1 15:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 vcve 于 2015-4-1 15:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

再加1uL RNase就行了。不用跑电泳检测，直接PCR就行

我加了5微升的RNA酶（10mg/ml），是不是浓度太大了，结果它把DNA都消化的一干二净了，难道真的是RNA酶加的量大于DNA了就会把DNA消化？（我打电话问过订RNA酶的公司，他们是那样说的。。。对不？？？）他们还说要把10mg/ml的RNA酶再稀释10倍，然后只用加1微升就可以了，请问到底RNA酶的使用浓度应该是多大才会合适啊？谢谢了~

喵咪[使用道具]
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发表于 2015-4-1 15:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 boom 于 2015-4-1 15:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

最上面的肯定是DNA，看图片质量还算可以，除了一些样的浓度较小之外。下面的大片大片的肯定是RNA，RNA的量还比较大，应该会影响你的PCR结果。同意楼上的建议，加1-5微升的 RNase, 37度水浴半小时后，或者直接就进行后续的PCR实 ...

太感谢你了哦~我想问问RNA酶的使用浓度应该是多少才合适啊？因为我做过实验，加的5微升的10mg/ml的RNA酶，结果它把DNA和下面的拖带全消化的一干二净。。。真晕啊！人家公司的人说我这浓度太大了，应该是1mg/ml的RNA酶加1微升就足够了

redbutterfly[使用道具]
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发表于 2015-4-1 15:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

把DNA产物放置一天就可以把RNA都降解了，这个影响不大。SSR-PCR应该是没问题的

云端ing[使用道具]
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发表于 2015-4-1 15:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

把DNA产物放置一天就可以把RNA都降解了，这个影响不大。SSR-PCR应该是没问题的

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