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标题:【求助】是P的基因组，我用的是hot start taq ...

mickeylin[使用道具]
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发表于 2015-4-1 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】是P的基因组，我用的是hot start taq ...

这是pcr产物电泳图，第一个阴性对照有条带，还有就是样品的条带有很很多上面有杂带，下面还有一些浅浅的条带，这些都是怎么回事啊？要怎么解决呢？好烦啊，求高手解救！！谢谢！


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 小中大
很有可能是样品污染了！
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 小中大
可能你的水被污染了
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 小中大
PCR特异性太差，提高退火温度
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 小中大

Marker条带不是很好
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 小中大
除了阴性对照，还需做单引物对照。不仅水可能污染，其他的也有可能。都更换一下试试。增加扩增特异性的方法：提高退火温度，降低镁离子，减少循环次数。
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发表于 2015-4-1 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

RT-PCR能解决这些问题，有条件做一次就行了，把条件摸好在做标准PCR。
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发表于 2015-4-1 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是不是污染了？
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发表于 2015-4-1 16:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

作为一个新手，我觉得你电泳就没跑好，阴性对照有条带可能是试剂污染了，我前几天也是发生了这样的污染，把试剂全部换了就好了
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发表于 2015-4-1 16:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1、阴性对照有条带说明有污染，给你一篇文章看看，主要是讲述如何避免污染的  cuturl('http://bbs.bbioo.com/forum.php?mod=attachment&aid=OTEwNDB8NzFjNTQ2YWI4ZGUwYjY4NTM3ZWFlN2VkMWM3MDc2NjR8MTQyNzg3NjM2OQ%3D%3D&request=yes&_f=.pdf')
     我们在做PCR时最好是上午做扩增，下午跑电泳，如果当天已经跑过电泳了就不要再扩增。如果有条件可以对实验室进行分区，扩增区不能和产物检测区在一个房间，枪也不能混用，工作服最好分开。
2、电泳跑的不好，为了避免边缘效应最好是将mark放在胶的中间，配胶的电解液要和电泳槽中的电解液是同一批配置的。
3、有杂带，可以提高退火温度，降低镁离子浓度，如果还不行只能换引物了
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