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标题:【求助】改变什么条件消除引物二聚体

蒲公英[使用道具]
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发表于 2015-4-1 16:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】改变什么条件消除引物二聚体

改变什么条件才能消除引物二聚体，谢谢！


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mickeylin[使用道具]
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发表于 2015-4-1 16:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
奇怪，没有看到二聚体啊？或者说二聚体并不严重啊
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发表于 2015-4-1 17:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

提高退火温度
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sistis[使用道具]
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发表于 2015-4-1 17:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

似乎可以添加 DMSO 或者glycine betaine

后面一种网上介绍的，我们实验室木有用过。。。

但是DMSO似乎会增加突变。。。
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 小中大
你指的是非特异性扩增吧，提高退火温度呀，不建议加入DMSO，如果是扩增基因后续有用的话，当然只是检测有无，我觉得是可以的。
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 小中大
引物少加点 会好点吧 并且这个应该不是二聚体 是非特异性扩增吧 建议换引物
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发表于 2015-4-1 17:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最本质的方法是设置一对好的引物，做个退火温度，选择较高一点的退火温度，还有就是少加点引物
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发表于 2015-4-1 17:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果这是引物二聚体也太亮了一些吧，是拖尾的问题吧，主要是要优化退火温度，退火温度主要参照软件设计引物里分析出来的温度，而不是合成引物单子上写的引物。优化了还有，就是引物浓度比较高了。
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发表于 2015-4-1 17:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
引物稀释浓度为10uM时，10ul反应体系一般每条引物只加0.1-0.2ul。
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小鱼鱼[使用道具]
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发表于 2015-4-1 17:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

退火温度
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