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标题:【求助】请大家分析一下PCR结果的原因

二丫头466[使用道具]
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发表于 2015-4-1 17:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】请大家分析一下PCR结果的原因


请问各位大侠，我这个pcr是什么原因，不知道为什么总是有杂带出现，梯度PCR也做过了，请各位大侠指教！急，急，急！
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中国特色[使用道具]
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发表于 2015-4-1 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是不是循环次数太多了啊？
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北风那个吹[使用道具]
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发表于 2015-4-1 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有可能是产物浓度大，琼脂糖检测时就会在目的条带附近发白！
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北风那个吹[使用道具]
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发表于 2015-4-1 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能是产物浓度大，电泳时就会在目的条带附近有发白的东西！
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发表于 2015-4-1 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 中国特色 于 2015-4-1 17:07 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

是不是循环次数太多了啊？

我的最终目的是为了做qPCR，我用的是文献上的方法和引物。这个gel跑了35个循环，其他的文献里面还介绍了40个循环。
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newway[使用道具]
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 小中大

文献里的PCR产物电泳图清楚吗？你可以减少到30个循环试一试，还有就是引物设计的问题，详细检查
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发表于 2015-4-1 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

引物设计是不是特异性不好？
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txwuyan[使用道具]
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发表于 2015-4-1 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Mg+浓度高了？
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二丫头466[使用道具]
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发表于 2015-4-1 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 txwuyan 于 2015-4-1 17:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

Mg+浓度高了？

我用的是Taq mix跑的！
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summerxx[使用道具]
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发表于 2015-4-1 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

酶切选择可能不好
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