考马斯亮蓝法的局限是否在这里？

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标题:[未解决]考马斯亮蓝法的局限是否在这里？

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疲惫黑眼圈[使用道具]
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发表于 2015-4-1 22:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

最近在检测玉米浸泡水中的蛋白质含量，发现用考马斯亮蓝法测出的蛋白质含量很低，在1g/L以下，而用凯氏定氮法测出含量在100g/L以上。是否说明其中大部分都是小分子的多肽和氨基酸，大分子蛋白含量很少？考马斯亮蓝法的局限是否在这里？对于小肽无法检测？
这时候是否可以用三氯乙酸处理后取上清直接用茚三酮的方法测氨基酸含量，然后用凯氏定氮法测总氮量（即小肽和氨基酸的总量），两者的差值极为小肽含量？
但是问题采用茚三酮的方法时候，是否小肽也会和茚三酮反应，从而影响导致测的氨基酸含量不准？

艾玛@加油[使用道具]
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发表于 2015-4-1 22:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

考马斯亮蓝和folin-酚法等测蛋白的方法都只能测可溶性蛋白，凯氏定氮测定是粗蛋白含量（总氮），玉米中的蛋白，主要存在于胚乳当中，主要以醇溶蛋白和谷蛋白居多，这些都是非水溶性的蛋白，而且小分子肽一般通过对大分子蛋白质降解得到，用水浸泡得到小分子肽这种说法是不科学的。

=心晴=[使用道具]
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发表于 2015-4-1 22:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

不能说考马斯亮蓝法不能测小肽，两者的差异我觉得是在于凯氏定氮测的是氮元素，其中就包括非蛋白的含氮物质，是一个较为粗略的结果，其值肯定要大于只能测定可溶性蛋白的考马斯亮蓝法测得值。

不化妆的lay[使用道具]
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发表于 2015-4-1 22:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

考马斯亮蓝不适合测量小分子肽，通常为具有生物活性的，凯氏测定的是总氮量，包括非蛋白质氮，通过换算，计算出蛋白质，后者肯定比前者大啦！

哦买噶[使用道具]
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发表于 2015-4-1 22:16 资料个人空间短消息加为好友

小中大

首先其中的无机氮也是很少的，总氮太高。浸泡水其中非蛋白氮应该也不多。所以我在想是不是其中大部分是小肽或者氨基酸？不然考马斯亮蓝法检测出蛋白质含量这么少？

集贤阁[使用道具]
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发表于 2015-4-1 22:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

比它大是肯定的。关键是大太多了，非蛋白质氮不应该有那么多，无机氮是很少的。而且液体澄清，离心过了

哈达[使用道具]
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发表于 2015-4-1 22:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

玉米中的醇溶性蛋白和谷蛋白还是存在于浸泡水中吗？其次，考马斯亮蓝法测定这两种蛋白质不行吗？

化小样[使用道具]
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发表于 2015-4-1 22:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

用考马斯亮蓝法只能测出一小部分可溶性的蛋白，而玉米中大部分的非水溶性性蛋白是测不出来的。

明灰灰[使用道具]
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发表于 2015-4-1 22:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

那这些醇溶性的蛋白也能溶于水吗？
我测量的是水溶液中的蛋白质，溶液是澄清的。
其次，这个资料是哪里找的？能推荐给我吗？
多谢！

誓言@谎言[使用道具]
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发表于 2015-4-1 22:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

醇溶蛋白不溶于水。。可溶于50%~90%的乙醇溶液，你测量到的蛋白质是玉米中能够溶于水的那部分可溶性蛋白。资料很多，书籍、文献都有，具体的你可以到网上搜一下关于蛋白质方面的资料。

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