【求助】求高手给分析下改变那些条件才能使条带清晰

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标题:【求助】求高手给分析下改变那些条件才能使条带清晰

sunshine039[使用道具]
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发表于 2015-4-2 20:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

求高手给分析下，改变那些条件才能使条带清晰

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2015-4-2 20:23

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douding66[使用道具]
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发表于 2015-4-2 20:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

是PCR结果么？非特异性条带太多，建议提高退火温度，检查引物特异性，降低循环次数，或者采用前5个循环较高退火温度，后25个循环稍低退火温度，可增加特异性

sunshine039[使用道具]
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发表于 2015-4-2 20:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢，是PCR结果，退火温度58,36个循环，还有这是三个引物，前三个是一个引物，中间三个是一个引物，后三个是一个引物

bling[使用道具]
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发表于 2015-4-2 20:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你是做梯度？还是检测目的基因？

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发表于 2015-4-2 20:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

第一点：提高模板质量。第二点：反应液中加入5%左右的DMSO（我做实验常用，感觉很有效果，可提高特异性），退火温度可用58℃和60℃。第三点：你的反应体系是多少？本人建议用10ul体系。第四点：引物特异性不好。希望能够帮得到你。

viviwang1987[使用道具]
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发表于 2015-4-2 20:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这种情况换个照胶的仪器会好点

xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2015-4-2 20:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

小体系做个梯度看看是不是特异性问题

panda王[使用道具]
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发表于 2015-4-2 20:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

提高退火温度试试

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发表于 2015-4-2 20:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

使用WeGo这个在线软件就可以了