【求助】请高手给分析一下拖带，非特异性的原因

PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】请高手给分析一下拖带，非特异性的原因

12 1/2 1 2 ››

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】请高手给分析一下拖带，非特异性的原因

birdfish[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 74196
精华 1
积分 539
帖子 654
信誉分 102
可用分 4196
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-8
状态离线

发表于 2015-4-2 20:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请高手给分析一下拖带，非特异性的原因，谢谢

附件

2015-4-2 20:27

IMG_0943.jpg (1.13 MB)

荒漠孤驴[使用道具]
二级
Rank: 2

UID 74209
精华 0
积分 128
帖子 35
信誉分 100
可用分 861
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-8
状态离线

发表于 2015-4-2 20:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

引物设计的特异性不高吧

nikonun[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 107972
精华 0
积分 218
帖子 176
信誉分 100
可用分 1636
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态离线

发表于 2015-4-2 20:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

（1）引物设计不合理，特异性不好，有选择的话就重新设计；
（2）如果没得选择你就适当提高退火温度，可以增加扩增特异性；
（3）你把你的胶浓度稍微提高点，你Marker的40、60bp的也有些拖带
（4）降落PCR可以增加产量和特异性
希望对你有帮助

greenbee[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 79370
精华 0
积分 710
帖子 1119
信誉分 100
可用分 6368
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态离线

发表于 2015-4-2 20:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可以先做一个梯度PCR，选择好合适的退火温度。

utt0989[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 78340
精华 1
积分 660
帖子 975
信誉分 102
可用分 5663
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-28
状态离线

发表于 2015-4-2 20:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我觉得你可以如3楼所说的提高下胶的浓度看看

lgm[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 75381
精华 1
积分 374
帖子 383
信誉分 102
可用分 2781
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-22
状态离线

发表于 2015-4-2 20:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

引物特异性不好。
退火温度过高。

PCR[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 74238
精华 0
积分 414
帖子 448
信誉分 100
可用分 3201
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-8
状态离线

发表于 2015-4-2 20:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

呵呵，过低。

雪原[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 74254
精华 0
积分 213
帖子 166
信誉分 100
可用分 1596
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-8
状态离线

发表于 2015-4-2 20:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果是做RACE，那条带就应该都切，如是普通pcr，应该去降低退火温度，适当的降低模板的加入量

nikonun[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 107972
精华 0
积分 218
帖子 176
信誉分 100
可用分 1636
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态离线

发表于 2015-4-2 20:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

首先我觉得这不是胶的问题；出现这种现象的原因很多的！你在试着摸索一下，但是前提是你要确保你的模板是好的！

3N4G[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 74178
精华 0
积分 408
帖子 536
信誉分 100
可用分 3461
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-7
状态离线

发表于 2015-4-2 20:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

引物的问题也可能是退火温度不对你这个80%是引物不够特异了

12 1/2 1 2 ››