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标题:【求助】图不清楚，请教高手给分析一下原因

bgf5[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】图不清楚，请教高手给分析一下原因

图不清楚，请教高手给分析一下原因


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2015-4-3 09:32
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youyou99[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
优化下PCR反应体系，退火温度是不是低了点/
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JK.jon[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

既没有给出实验条件，也不说明遇到什么问题，这样的提问太不负责任
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bgf5[使用道具]
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 小中大

回复 #3 JK.jon 的帖子

退火温度是56,39个循环的，
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发表于 2015-4-3 09:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
退火温度低，引物特异性不好，镁离子浓度高，都可能，我遇到过这种情况，把条件摸索一下就行了
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 小中大
把退火温度提高2℃试试，也可以 做个梯度
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

（1）引物特异性不好
（2）退火温度太低，推荐做个降落PCR
（3）模板用量太大，如果是人基因组的话你扩这么小的片段用个50~100ng足够了
（4）感觉你的胶好像跑的也有些问题
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发表于 2015-4-3 09:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

目的条带，正对照，图上啥都木有
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发表于 2015-4-3 09:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以做个touch down！另外，你的酶是不是加多了？实在不行的话整个热启动！
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发表于 2015-4-3 09:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
拖带太多，引物特异性不好，感觉你的退火温度也有点低，多摸索一下条件就行啦
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