【求助】电泳中的弱带 - 经验共享

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标题:【求助】电泳中的弱带

shenkunjie[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你这是在检单菌落吗？你这个肯定不是电泳漂样造成的，我看着像是你PCR模板的问题，如果是检菌，我建议你有4~10μl水把单菌落重悬，混合均匀做模板。PCR条件应该没问题

shenkunjie[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

做PCR时只需要用1~2μl做模板即可，不要太多了，太多对PCR会造成影响的；剩余的你可以加LB摇了

ujne[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

应该是扩的问题，你仔细看看胶，二聚体亮的目标条带都弱，你引物都形成二聚体了没有和目的片段结合扩增

zhezhe[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

追问是否是菌落pcr？若是菌落检测，这种情况比较常见，菌液浓的话会出现假阳性，如果扩增条件不好的话也会出现阳性带较弱的情况。建议可以另选一对引物对出现淡淡阳性带的样本进行检测。
还有就是电泳液要换，避免污染。电泳时也要注意！
希望能帮到你！

qianqin1977[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

轻微污染的后果，阴性对照和MARKER是PCR实验必须要做的！

dior[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

会不会是引物二聚体？

whitesheep[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我做时没有这么亮！

bs4665[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

经常遇到这样的事情，pcr真的还是要看god的心情

ha111[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

其实pcr的重复性有时候不是很好的。

cj_mondy[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

PCR过程中经常会产生非特异扩增或产生引物二聚体等小片段，这都是常见的。

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