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这是关于酶切位点保护碱基的表,基本意思是,就举Acc I 和Afl III 为例吧,我们设计引物的时候,先把引物根据模板设计好,然后再将酶切位点加在5‘端,即Acc I ---GATC------ 或者Afl III ---GATC----,如果这样的引物,在你PCR结束后,酶切位点的5’是没有碱基的,这样的话拿去酶切会影响酶对该位点的切割,我们知道限制性内切酶都有序列识别结构域和序列切割结构域,这样的话,虽然酶能识别相应序列,但由于酶切位点5’端裸露,酶却不能切割,顾为了使酶能够顺利切割,而额外几个碱基,叫保护碱基,那么保护碱基加几个才能起到保护作用呢,这就更具体的限制酶有关了,有点不需要,有的一个就行了,有点两个或者三个,有点甚至四五个还不行,你比如,上表中Acc I加3个切割效率还是为0, 而Afl III两个就足够了,而Asc I不需要加,至于要不要加保护碱基,加几个,具体的酶具体分析
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