【求助】请教高手给分析下非特异性扩增的原因

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标题:【求助】请教高手给分析下非特异性扩增的原因

二丫头466[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

引物筛选，每条带引物不同，退火温度为56.1.39个循环

附件

2015-4-3 09:59

20120215.JPG (28.12 KB)

bs4665[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

您好楼主，我想问一下您这图片是用自动成像系统扫描上去的？还是用相机照出的？谢谢。

mimili_901[使用道具]
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发表于 2015-4-3 09:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

每种引物都有自己最为特异的反应条件，你做这个的目的是什么....

二丫头466[使用道具]
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发表于 2015-4-3 10:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

自动成像的，还请高手给分析一下非特异扩增的原因，怎么弄才清楚

mimili_901[使用道具]
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发表于 2015-4-3 10:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 二丫头466 于 2015-4-3 10:00 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

自动成像的，还请高手给分析一下非特异扩增的原因，怎么弄才清楚

拍出的照片都这么小吗可以调节成大图片啊在拍照时候

babybabe[使用道具]
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发表于 2015-4-3 10:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你目的条带是多少~

二丫头466[使用道具]
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发表于 2015-4-3 10:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我是新手，也不知道要几条，只是想让条带清晰

okhaha[使用道具]
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发表于 2015-4-3 10:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

有很多原因，
1、胶的问题
2、引物特异性不强，
3、PCR条件不合适，
4、跑胶时间太长，
5、酶的特异性不好，可以试试primer start等
建议楼主在探索以下条件吧

vcve[使用道具]
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发表于 2015-4-3 10:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我看你的片段大小不一，推测可能是引物的Tm值不同，你用同一个温度退火的话可能会出现这样情况。你的模板是不是基因组？你如果想一起扩增，你尝试用Touch Down PCR做下，试试从64℃~58℃

vcve[使用道具]
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发表于 2015-4-3 10:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

一般非特异扩增的原因比较多，诸如：模板过量、循环次数太多（25~35比较适宜）、酶用量过大、引物特异性不好；很有可能是引物自身设计的问题，特异性不好

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