农残检测

　　1.分析目标化合物

　　恶唑菌酮

　　2、仪器设备

　　带紫外分光光度检测器的高效液相色谱仪(HPLC(UV))

　　液相色谱--质谱仪(LC/MS)

　　3、试剂

　　丙酮

　　氯化钠溶液

　　正己烷

　　无水硫酸钠

　　乙腈：高效液相色谱用

　　甲醇：高效液相色谱用

　　恶唑菌酮标准品：含恶唑菌酮98%以上，熔点为140℃～143℃。

　　4.试验溶液的制备

　　1) 提取方法

　　豆类：称取10.0g样品，加入20mL水，放置2小时。

　　水果和蔬菜：称取20.0g样品。

　　加入100mL丙酮，均质后，抽滤。滤纸上的残留物中加入50mL丙酮，均质后，按上述同样操作，合并所得的滤液。40℃以下浓缩至约30mL。浓缩液中加入100mL 10%氯化钠溶液，分别用100mL和50mL正己烷振荡提取两次。提取液中加入无水硫酸钠脱水，滤去无水硫酸钠后，滤液在40℃以下浓缩，除去溶剂。残留物中加入5mL乙醚：正己烷(1：19)混合溶液溶解。

　　2)净化方法

　　①硅胶柱色谱法

　　在硅胶小柱(690mg)中注入5mL正已烷，舍弃流出液，注入1)所得到的溶液，舍弃流出液。注入10mL乙醚：正己烷(1：19)混合溶液，舍弃流出液。再注入20mL乙醚：正己烷(3：7)混合溶液，溶出液40℃以下浓缩，除去溶剂。残留物中加入2mL丙酮：正己烷(1：19)混合溶液溶解。

　　②酰胺丙基甲硅烷基化硅胶柱色谱法

　　在酰胺丙基甲硅烷基化硅胶小柱(500 mg) 中依次注入5mL丙酮：正已烷(1：19)混合溶液和5mL正已烷，舍弃各流出液。注入①所得的溶液，舍弃流出液。再注入8mL丙酮：正已烷(1：19)混合溶液，舍弃流出液。再注入20mL丙酮：正已烷(1：9)混合溶液，流出液40℃以下浓缩，除去溶剂。残留物中2.5mL甲醇溶解后，再加入 2.5mL水。

　　③ 十八烷基甲硅烷基化硅胶柱色谱法

　　在十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱((500 mg ) 中依次注入5mL甲醇和5mL水，舍弃各流出液。注入②所得的溶液，舍弃流出液。再注入15 mL水：甲醇(1：1)混合溶液，舍弃流出液。再注入8mL乙腈：水(7：3)混合溶液，溶出液在45℃以下浓缩，除去溶剂。残留物溶解在乙腈：水(1：1)混合溶液中，准确至2mL(豆类为1 mL)作为试验溶液。

　　5.标准曲线的制作

　　用乙腈：水(1：1)混合溶液将恶唑菌酮标准品配制成0.1～2 mg/L的溶液数点，分别注入50 μL于HPLC中，用峰高法或面积法绘制成标准曲线。

　　6.定量试验

　　注入50μL试验溶液于HPLC中，根据5的标准曲线求出恶唑菌酮的含量。

　　7.测定条件

　　HPLC

　　检测器：UV(波长230 nm)

　　柱：十八烷基甲硅烷基化硅胶(粒径5μm)，内径4.6 mm、长150 mm

　　柱温：40℃

　　流动相：乙腈：水(1：1)混合溶液。

　　保留时间标准：约16～17 分钟

　　8.定量限

　　0.01 mg/kg。

　　9.注意事项

　　1)检测方法概述

　　本方法用丙酮从样品中提取恶唑菌酮，转溶到正己烷后，用硅胶小柱、酰胺丙基甲硅烷基化硅胶小柱和十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱净化，HPLC(UV)测定、LC/MS确证。。

　　2)注意点

　　①要注意酰胺丙基甲硅烷基化硅胶小柱因制造厂商不同存在性能差异。用标准品进行预先溶出试验。

　　②来自酰胺丙基甲硅烷基化硅胶小柱的溶出液的浓缩残留物，溶解在甲醇后，加入水。如直接加入水：甲醇(1：1)混合溶液，会出现残留物凝 固在玻璃表面不溶解的情况。